[发明专利]利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法

说明书

本发明公开了利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法，改变了传统的融合方法。将任意一侧电极添加通电螺线圈，使融合电极带有强磁性吸引带有磁性的供体细胞黏贴到电极上，形成电极‑供体细胞‑卵母细胞接触面在同一垂直面上，实现了无缝贴合，保证了电击的准确性，减少了体外操作时间，操作便捷；本方法将克隆胚胎的融合时间从3‑5秒/枚提高到3‑5秒/20‑30枚，极大的缩短了克隆胚胎在体外的操作时间，提高融合效率，为实验室内批量生产克隆胚胎提供了技术支持。本发明具有操作方便快捷，融合效率高的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法。

背景技术

体细胞克隆技术是指把动物体细胞经过抑制培养，使细胞处于休眠状态。采用核移植的方法，利用细胞拆合或细胞重组技术，将卵母细胞去核作为核受体，以体细胞或含少量细胞质的细胞核即核质体作为核供体，将后者移入前者中，构建重组胚，供体核在去核卵母细胞的胞质中重新编程，并启动卵裂，开始胚胎发育过程，妊娠产仔，克隆出动物的技术，又可称之为体细胞核移植技术。

体细胞克隆技术在克隆猪的生产中已经得到了广泛的应用，但是在整套克隆猪生产体系当中克隆胚胎的融合是一个重要的环节，目前普遍使用的方法就是利用制作的玻璃拨卵针将重构胚中带有供体细胞的一侧手动拨到垂直于电极的方向，此方法不但耗时长、融合效果不稳定，徒手操作受人员不固定的限制导致结果不一致，时间过长还容易导致融合液的蒸发，渗透压升高使重构胚脱水死亡；以上问题促使克隆胚胎的制作无法达到工厂化生产。

发明内容

本发明解决的技术问题在于克服现有技术的手工拨动，时间长，操作繁琐和融合效率低下的缺陷，提供利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法。所述利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法具有操作方便快捷，融合效率高等特点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：利用带磁供体细胞批量融合克隆胚胎的方法，包括以下步骤,

S1：卵母细胞和体细胞的获取；

S2：卵母细胞的体外成熟培养；

S3：从产磁细菌中提取磁性质粒；

S4：体细胞的培养；

S5：将带磁质粒转染到供体细胞内；

S6：利用体细胞核移植技术制作重构胚；

S7：在融合设备的融合电极任意一端加装电螺线圈；

S8：对螺线圈通电，然后将重构胚进行融合(激活)；

S9：对融合(激活)数据进行记录、检测和总结。