[发明专利]一种异鼠李素光亲和探针及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种异鼠李素光亲和探针，其特征在于，该探针以异鼠李素为活性基团，双吖丙啶为光交联基团，炔烃为生物正交基团，具有如下所示结构：

2.一种如权利要求1所述的异鼠李素光亲和探针的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将槲皮素加入无水二氯甲烷和DMF混合溶液中搅拌溶解，在冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺和氯甲基甲基醚，搅拌0.5～1.5h，然后恢复至室温反应16～18h，反应完成后，旋蒸除去溶剂、萃取、干燥、柱层析纯化得到中间体1，中间体1的结构式如下所示：

S2：将步骤S1得到的中间体1和K₂CO₃加入无水DMF溶液中搅拌溶解，向溶液中加入光交联基团(3-(3-炔-1-丁基)-3-(2-碘乙基)-3H-双吖丙啶)，并在62～68℃加热回流反应48～96h，旋蒸除去溶剂、萃取、干燥、柱层析纯化得到中间体2，中间体2的结构式如下所示：

S3：将步骤(2)所得中间体2加入丙酮溶液中搅拌溶解，在冰浴下向溶液中加入2.5～3.5N HCl，搅拌0.5～1.5h，然后恢复至室温反应5～7d；反应结束后加入水淬灭反应，萃取、洗涤、干燥，旋干溶剂，柱层析纯化得到化合物3，化合物3的结构式如下所示：

化合物3即为所述的异鼠李素光亲和探针。

3.根据权利要求2所述的一种异鼠李素光亲和探针的合成方法，其特征在于，步骤S1中，包括以下条件中的任一项或多项：

(i)槲皮素、N,N-二异丙基乙胺和氯甲基甲基醚的摩尔之比为1:(3～4):8；

(ii)槲皮素与(无水二氯甲烷和DMF混合溶液)的质量：体积之比为1g:(200～300)mL；

(iii)无水二氯甲烷和DMF混合溶液中，无水二氯甲烷和DMF的体积之比为(20～15):1。

4.根据权利要求2所述的一种异鼠李素光亲和探针的合成方法，其特征在于，步骤S2中，包括以下条件中的任一项或多项：

(i)中间体1、K₂CO₃和光交联基团(3-(3-炔-1-丁基)-3-(2-碘乙基)-3H-双吖丙啶)的摩尔之比为1:(1.2～1.3):2；

(ii)中间体1与无水DMF溶液的用量之比为10mg:(0.5～1)mL。

5.根据权利要求2所述的一种异鼠李素光亲和探针的合成方法，其特征在于，步骤S3中，包括以下条件中的任一项或多项：

(i)丙酮与HCl的体积之比为(5～7):1；

(ii)中间体2与丙酮的用量之比为10mg:(0.5～1)mL。

6.一种如权利要求1所述的异鼠李素光亲和探针在癌细胞成像中的应用。

7.根据权利要求6所述的异鼠李素光亲和探针的应用，其特征在于，所述的癌细胞包括乳腺癌细胞MDA-MB-231、结肠癌细胞HCT-116或前列腺癌细胞PC-3。

8.一种如权利要求1所述的异鼠李素光亲和探针在癌细胞原位鉴定异鼠李素直接作用靶蛋白中的应用。

9.根据权利要求7所述的异鼠李素光亲和探针的应用，其特征在于，所述的靶蛋白与探针共价结合，通过紫外照射，实现探针中的双吖丙啶基团与包括癌细胞增殖、侵袭在内的生物过程相关蛋白的共价交联。

10.根据权利要求8或9所述的异鼠李素光亲和探针的应用，其特征在于，所述的癌细胞包括乳腺癌细胞MDA-MB-231、结肠癌细胞HCT-116或前列腺癌细胞PC-3。