[发明专利]阿卡波糖杂质对照品的制备方法

权利要求书

1.阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取阿卡波糖杂质富集液，调节pH值至酸性，减压蒸馏浓缩成阿卡波糖杂质浓缩液；

2）调节步骤1）中的浓缩液的pH至碱性，然后滤膜过滤得杂质浓缩液；

3）连续两次以反相硅胶填料分离纯化条件对杂质浓缩液进行洗脱，收集含阿卡波糖杂质的馏分；

4）再以聚酰胺填料分离纯化条件对步骤3）收集到的馏分进行纯化，收集高纯度的馏分；

5）将步骤4）收集到的高纯度馏分混合后减压蒸馏除去甲醇，加水溶解，调节pH值至酸性，放入冰箱进行预冻；

6）随后将步骤5）预冻处理后的馏分在冷冻干燥机中进行冻干，得白色结晶性粉末，即得阿卡波糖杂质。

2.如权利要求1所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于步骤1）中减压蒸馏浓缩至每毫升浓缩液中含有阿卡波糖杂质10-40mg，步骤1）和步骤5）中均用稀盐酸调节pH值至3.0-6.0，步骤2）中用稀氨水调节pH至7.0-10.0。

3.如权利要求1所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于步骤3）中反向硅胶填料选用C₁₈填料，其分离纯化条件为：色谱柱：Welch Xtimate C₁₈，10μm填料填装200-400g；流动相：甲醇-水溶液＝8-92(V/V)；流速：40-70mL/min；进样体积：10mL；检测波长：210 nm，其中，甲醇-水溶液中含0.1%的NH₃。

4.如权利要求1所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于步骤4）中聚酰胺填料选用NH₂填料，其分离纯化条件：色谱柱：Welch Ultimate XB-NH₂，10μm填料填装150-350g；流动相：甲醇；流速：40-70mL/min；进样体积：10mL；检测波长：210 nm。

5.如权利要求3或4所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于所述流速为50-60mL/min。

6.如权利要求1所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于步骤1）中每次收集的阿卡波糖富集液的量为200-500ml，步骤5）中加水溶解的体积为20-50ml。

7.如权利要求1所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于步骤6）中冷冻干燥机的条件为：0.01~0.03 Mpa压力条件下冷冻温度为-70℃~ -80℃。

8.如权利要求7所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于冷冻压力为0.02Mpa，冷冻温度为-76℃。

9.如权利要求1所述的阿卡波糖杂质对照品的制备方法，其特征在于步骤4）和步骤5）中的高纯度是指纯度大于95%的馏分。