[发明专利]一种用于检测诺氟沙星的试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及食品安全检测免疫分析技术领域，更具体地，涉及一种用于检测诺氟沙星的试剂盒及检测方法。试剂盒包括：诺氟沙星‑生物素标记物、诺氟沙星多克隆抗体、修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶、金纳米粒子、抗坏血酸磷酸、硫酸铜溶液和铜离子探针，金纳米粒子包括连接有叠氮基的金纳米粒子和连接有炔基的金纳米粒子。本发明技术具有灵敏度高、检测范围宽、操作简单、特异性好等优点，对诺氟沙星的超灵敏检测具有重要的实际意义，对于实现现场快速、超灵敏侦检技术具有很好的指导意义。

技术领域

本发明涉及食品安全检测免疫分析技术领域，更具体地，涉及一种用于检测诺氟沙星的试剂盒及检测方法。

背景技术

诺氟沙星(Norfloxacin，NOR)抗菌类药是喹诺酮类的第三代产品，其通过阻断细菌产生DNA转录酶，抑制细菌DNA复制从而起到抑菌作用。随着诺氟沙星使用量的增加，滥用现象频发导致在食品中残留严重。NOR常在饮料、肉制品、牛奶及大多数乳制品中出现，是一种广谱类抗生素，其在动物体内很难完全降解，大部分会在动物体内聚集、残留，食用含NOR含量超标的食物会引起变态反应、过敏反应、免疫抑制、致癌、致畸、致突变等，我国已禁止在畜牧养殖饲料中添加NOR作为抗菌药。

目前已建立起的NOR的检测技术主要包括高效相液色谱法检测技术、微生物测定法技术、免疫学检测技术等，其中以免疫学检测技术为主，包括免疫扩散法、凝集试验、放射性免疫测定、酶联免疫吸附、免疫荧光、化学发光酶联免疫检测等。ELISA作为传统的检测技术已经在部分地区广泛使用，但在实际样品(如乳制品、肉制品)的检测过程中，容易受到食品或人体血液中复杂成分的影响，从而使得该技术在灵敏度的检测上仍存在一定的缺陷。

因此，建立食品中NOR的高灵敏度检测技术对于消费者健康及该菌引起食物中毒的临床诊断具有十分重要的意义。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提供一种用于检测诺氟沙星的试剂盒及检测方法。

本发明的第二发明目的在于提供一种诺氟沙星的检测方法。

为了完成本发明的发明目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种用于检测诺氟沙星的试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)诺氟沙星-生物素标记物；

(2)诺氟沙星多克隆抗体；所述诺氟沙星多克隆抗体包被于多孔板上；

(3)修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶；

(4)金纳米粒子；所述金纳米粒子包括连接有叠氮基的金纳米粒子和连接有炔基的金纳米粒子，所述金纳米粒子用于检测一价铜离子；

(5)抗坏血酸磷酸；

(6)硫酸铜溶液；

(7)铜离子探针；所述铜离子探针用于检测二价铜离子；

所述诺氟沙星-生物素标记物用于与所述诺氟沙星多克隆抗体结合，且用于与所述修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶结合；

所述修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶用于还原所述抗坏血酸磷酸为抗坏血酸，所述抗坏血酸用于将所述硫酸铜溶液中的二价铜离子还原为一价铜离子。

可选的，所述金纳米粒子的直径为13～17nm；

优选的，所述连接有叠氮基的金纳米粒子和所述连接有炔基的金纳米粒子的摩尔比为1：1；

更优选的，所述金纳米粒子的浓度为0.5～2OD。

可选的，所述诺氟沙星-生物素标记物中，每1mg诺氟沙星上标记有生物素0.02～0.06mg；优选为0.04mg；