[发明专利]检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法，该方法包括以下步骤：S1.制备包含上皮组织脱落细胞的细胞悬液；S2.滴加细胞悬液至装载叶酸受体介导的特殊染色液(FRD染色液)的反应试管中；S3.密封反应试管，颠倒摇晃试管中的混合液体；S4.静置等待反应试管壁上包含上皮组织脱落细胞的挂壁液体显蓝色或出现蓝色颗粒。本发明的检测方法准确度高，能够广泛应用于上皮组织脱落细胞的细胞学特殊染色。本发明还提供一种本发明的检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法所设计的试剂盒，包括采样工具、细胞保存液、FRD染色液、可密封的反应试管以及一次性使用吸管的组合。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法及试剂盒。

背景技术

叶酸受体在肿瘤细胞等病变细胞表面高表达，而在正常细胞则较少表达或无表达。叶酸受体介导的特殊染色法(FRD染色法)是近年迅速发展起来的一种新的较便捷的检测方法，该方法中，染色液的主要成分是叶酸衍生物、还原态亚甲基蓝、乙酸等，呈棕黄色，由于叶酸受体介导，亚甲基蓝对肿瘤细胞及黑色素有高度的亲和性，其氧化还原性使亚甲基蓝在肿瘤组织的氧化还原态中表现不同的变色反应。其反应原理是：如果存在上皮组织脱落细胞表面的叶酸表达程度高，染色液中的叶酸就会通过细胞表面的叶酸受体，迅速进入细胞胞浆，同时还原型的亚甲基蓝也进入细胞胞浆内。叶酸被还原成四氢叶酸，参与到一碳单位的代谢过程中。而肿瘤细胞会处于强烈的氧化应激环境中，还原型的亚甲基蓝则被细胞内广泛存在的活性氧(ROS)氧化，变为蓝色的氧化型的亚甲基蓝。由于有许多生物分子的进入，使得细胞内的渗透压升高，致使氧化型的亚甲基蓝逸出细胞外，则可在染色液上显现出蓝色，就提示该样本细胞表面的叶酸受体表达增高，细胞内的活性氧压增大，铁蛋白含量高，预示着脱落细胞可能有异常病变，需要进一步检测。

目前，该染色法应用于检测宫颈上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的检测方法为：放置阴道扩张器暴露患者宫颈口处的上皮组织并擦拭干净分泌物，然后取医用棉签蘸取FRD染色液，将棉签用力涂抹在宫颈上皮组织表面3-5圈，再在宫颈口按压3-5秒，取出棉签观察其颜色变化并参照比色卡判读结果。该方法存在如下缺陷：1.用医用棉签蘸取染色液后接触宫颈处组织染色脱落细胞或用医用棉签取样宫颈脱落细胞再进行染色，都很难免出现大量假阳性。因为患者的宫颈处是一个复杂的、敏感的组织，大量的分泌物、炎症感染甚至宫颈隐性出血少量血细胞都会使进行FRD染色的棉签上出现假阳性，从而增加医生对结果准确判断的难度。2.用医用棉签蘸取染色液的方法极其容易受到外部检测环境的影响。因为FRD的染色液处于还原态，极其容易受到检测环境中空气、温度、湿度甚至检测操作者的影响，所以，该方法无法避免外部环境因素对染色液的影响，从而导致结果不准确。

因此，亟需发明一种能克服现有的FRD染色法检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的应用缺陷，能够避免外部检测环境影响，使其检测结果更加准确的检测新方法。

发明内容

发明要解决的问题

现有技术中，使用医用棉签接触宫颈处脱落细胞进行染色的检测方法具有影响因素多，对操作人员判读经验要求高，但结果准确度不高的缺点，本发明的目的是提供一种能准确检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法。本发明的又一目的是提供一种根据本发明检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法所设计的试剂盒。

用于解决问题的方案

一种检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法，包括以下步骤：

S1.制备包含上皮组织脱落细胞的细胞悬液；

S2.滴加所述细胞悬液至装载叶酸受体介导的特殊染色液(FRD染色液)的反应试管中；

S3.密封反应试管，颠倒摇晃试管中的混合液体；