[发明专利]酰胺水解酶SaAH及其编码基因和应用有效

申请号：	202110708502.X	申请日：	2021-06-23
公开（公告）号：	CN113308453B	公开（公告）日：	2022-05-17
发明（设计）人：	刘建国;李静;王淼;谭雯斐;辛文	申请（专利权）人：	中国石油大学（华东）
主分类号：	C12N9/80	分类号：	C12N9/80;C12N15/55;C12N1/20;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/40;C12R1/01;C12R1/19
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地址：	266580 山***	国省代码：	山东;37
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摘要：
搜索关键词：	水解 saah 及其编码基因应用
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【说明书】：

本发明公开了酰胺水解酶SaAH及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种酰胺水解酶，命名为SaAH蛋白，是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还保护SaAH蛋白作为酰胺水解酶的应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉酰胺水解酶SaAH及其编码基因和应用。

背景技术

酰胺水解酶是水解酶超家族中的一员，能够催化酰胺水解为相应的羧酸和氨。该反应不仅可以用于制备光学纯的药物及化学中间体，还能消除环境中卤代酰胺类除草剂的残留。到目前为止，人们对酰胺水解酶的研究报道相对较少。

此外，目前已报道的酰胺水解酶的性质较差，不能满足其应用的需要。如大部分已发现的微生物来源的酰胺水解酶的活性较低、热稳定性较差。因此，寻找性质优良的酰胺水解酶及其新的来源，并通过异源表达提高其产酶水平，是目前生物转化酰胺类化合物的重要任务。本发明提供了新颖来源的酰胺水解酶SaAH及其编码基因和应用。

发明内容

本发明的目的是提供酰胺水解酶SaAH及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种酰胺水解酶，命名为SaAH蛋白，氨基酸序列由序列表中序列1所示。由于氨基酸序列的特殊性，任何含有序列表中序列1所示氨基酸序列的肽蛋白的片段或其突变体，只要其与前述氨基酸序列具有99％以上同源性，且具有酰胺水解酶功能，均属于本发明保护范围。具体的，所述改变包括氨基酸序列中一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加和/或替换。

SaAH蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。

优选的，所述基因的碱基序列如序列表中序列2所示，该基因序列来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，由906个碱基组成。由于核苷酸序列的特殊性，任何序列表中序列2所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90％以上同源性，均属于本发明保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。

含有所述基因的重组表达载体、表达盒或重组微生物均属于本发明的保护范围。

本发明还保护SaAH蛋白作为酰胺水解酶的应用。应用SaAH蛋白作为酰胺水解酶时，采用的温度为30-70℃，采用的pH为3-11。应用SaAH蛋白作为酰胺水解酶时，采用的温度为40℃，采用的pH为6。

本发明提供的酰胺水解酶SaAH具有较高的酶活力，反应温度宽泛，反应pH宽泛，底物谱广。

盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)已于2020年7月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国，武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020375。

附图说明

图1为菌株JH的照片。

图2为菌株JH的系统发生树。

图3为SaAH蛋白溶液的电泳图。

图4为检测最适pH时的相对酶活结果。

图5为检测最适反应温度时的相对酶活结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。