[发明专利]一种原料乳中脂肪酶活力的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种原料乳中脂肪酶活力的检测方法，其特征在于，包括如下步骤；

S1，配置样品稀释液，将原料乳脱脂处理，得到下清液；将所述下清液和磷酸缓冲液按照体积比为1：7-1:9混合，得到样品稀释液；配制脂肪酶稀释液；

S2，待测样品和加标样品的制备；

取第一容器，向第一容器中加入磷酸缓冲液，然后加入样品稀释液，最后加入底物溶液；混匀，得到待测样品；

取第二容器，向第二容器中加入磷酸缓冲液，然后加入样品稀释液，加入脂肪酶稀释液，最后加入底物溶液；混匀，得到加标样品；第一容器和第二容器中加入的样品稀释液的量相同；所述底物溶液为4-硝基苯基辛酸酯的二甲基亚砜溶液；

S3，预处理

将待测样品水浴孵育，加入终止液，得到待上机样品；

将加标样品水浴孵育，加入终止液，得到待上机加标样品；

待测样品和加标样品中加入的终止液的量相同；所述终止液为乙腈和甲酸的混合物；

S4，检测

检测待上机样品在316nm处的吸光度Y_样品以及待上机加标样品在316nm处的吸光度Y_加标，根据脂肪酶活力计算值-吸光度的关系式计算得到待测样品的脂肪酶活力计算值和加标样品的脂肪酶活力计算值；

脂肪酶活力计算值-吸光度的关系式为，Y_吸光度＝KX_酶活力 +B；

式中，Y_吸光度为待上机测试溶液的吸光度，X_酶活力为待测溶液的脂肪酶活力计算值，单位为mU/mL；其中待测溶液经过水浴孵育加入终止液后，得到待上机测试溶液；K和B为系数；

计算回收率，回收率计算公式为：R_回收率=（X_加标-X_样品）*100%/C；

式中，X_样品为待测样品的脂肪酶活力计算值，单位为mU/mL；X_加标为加标样品的脂肪酶活力计算值，单位为mU/mL；C为加标量，单位为mU/mL；

再利用回收率计算待测样品中脂肪酶活力真实值，脂肪酶活力真实值计算公式为：A_真实值=X_样品/R_回收率；式中A_真实值是指待测样品中的脂肪酶活力真实值，单位为mU/mL;

其中，步骤S4中脂肪酶活力计算值-吸光度的关系式Y_吸光度=K X_酶活力+B，经过如下步骤获得；

取多个容器，分别向每个容器中加入相同量的磷酸缓冲液，然后向每个容器中分别加入不同量的脂肪酶稀释液，然后向每个容器中加入底物溶液；得到多个不同脂肪酶浓度的标准曲线样品；

将多个标准曲线样品水浴孵育，然后向多个标准曲线样品分别加入终止液，得到多个待上机标准曲线样品；分别测试每个待上机标准曲线样品在316nm处的吸光度，获得不同脂肪酶浓度的标准曲线的吸光度，拟合一次回归方程，得到脂肪酶活力计算值-吸光度的关系式中的K和B的数值。

2.根据权利要求1所述的原料乳中脂肪酶活力的检测方法，其特征在于，回收率计算公式，R_回收率=（X_加标-X_样品）*100%/C；其中C的值为10mU/mL。

3.根据权利要求1所述的原料乳中脂肪酶活力的检测方法，其特征在于，所述终止液中乙腈和甲酸的体积比为12:1。