[发明专利]一种祁术成熟胚高效离体再生体系建立的方法

权利要求书

1.一种祁术成熟胚高效离体再生体系建立的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）种子的选取与预处理，将选取的种子用过滤灭菌的低温等离子体活化水浸泡2～4 min，然后用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；（2）将预处理后的成熟胚，接种于不定芽诱导培养基中，进行不定芽的诱导培养；（3）将诱导出不定芽的成熟胚转接于增殖培养基中进行不定芽的增殖培养；（4）将增殖的不定芽丛切成适宜大小的切块，转接于伸长培养基中进行不定芽的伸长培养；（5）待不定芽长至2～3 cm并伴有完整叶片时，转入生根培养基中进行生根培养，最终获得完整的祁术再生植株；

所述步骤（1）中，低温等离子体活化水中，Ar为离子源，通过介质阻挡放电装置处理双蒸水2 min；

所述步骤（2）中，所述的不定芽诱导培养基为：DKW + 0.5～2.0 mg/L ZT + 2.0～5.0mg/L AgNO₃ + 3.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8；

所述步骤（3）中，所述的不定芽增殖培养基为：DKW + 0.2～1.5 mg/L ZT + 0.05～0.5mg/L TDZ + 3.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8；

所述步骤（4）中，所述的不定芽伸长培养基为：DKW + 0.05～0.5 mg/L GA₃ + 0.2～1.0mg/L KT + 3.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8；

所述步骤（5）中，所述的不定芽生根培养基为：1/8 DKW + 10～50 µM 褪黑素 + 0.1～2.0 mg/L KIBA + 1.0～2.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8。

2.根据权利要求1所述的一种祁术成熟胚高效离体再生体系建立的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述的种子的选取与预处理是指选取有活力的成熟饱满的祁术种子，将其置于250 ml塑料培养瓶中，于流水下冲洗10～20 min，然后将种子置于无菌操作台中，用无菌水冲洗3～4遍后，用75%无水乙醇进行2次表面消毒，每次消毒15～20 s， 2次之间用无菌水冲洗2～3遍；然后用 0.1%（w/v）的升汞溶液消毒3～5 min，之后用无菌水冲洗6～8遍；进一步将上述种子用过滤灭菌的低温等离子体活化水浸泡2～4 min，然后用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用。

3.根据权利要求1所述的一种祁术成熟胚高效离体再生体系建立的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述的不定芽诱导培养基为：DKW + 1.0 mg/L ZT + 3.0 mg/L AgNO₃ +3.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8。

4.根据权利要求1所述的一种祁术成熟胚高效离体再生体系建立的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述的不定芽增殖培养基为：DKW + 0.75 mg/L ZT + 0.25 mg/L TDZ +3.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8。

5.根据权利要求1所述的一种祁术成熟胚高效离体再生体系建立的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，所述的不定芽伸长培养基为：DKW + 0.25 mg/L GA₃ + 0.5 mg/L KT +3.0% (w/v) 蔗糖 + 0.7% (w/v) 琼脂，pH=5.8。