[发明专利]一种ALG1-CDG、PMM2-CDG生物标记物的合成方法及其应用

说明书

本发明公开了一种ALG1‑CDG、PMM2‑CDG生物标记物的合成方法及其应用，本发明涉及ALG1‑CDG、PMM2‑CDG生物标记物(唾液酸‑半乳糖‑两个N‑乙酰氨基葡萄糖：Sia‑Gal‑Gn2)体外化学酶合成方法以及将其连接到载体蛋白上提高其免疫原性的制备方法。本发明进一步涉及所述抗体在对ALG1‑CDG、PMM2‑CDG两种先天性糖激化缺陷(CDG)临床检测中的用途，与传统基因组学测序、糖组学分析以及高通量筛选等临床检测方法相比，通过抗体与血清中生物标记物的特异性结合可以更快，更便捷，更节约的做出诊断。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及到一种ALG1-CDG、PMM2-CDG生物标记物的合成方法及其应用。

背景技术

蛋白质N-糖基化是蛋白质翻译后修饰的主要方式，这一过程发生在内质网中。其中，与蛋白相连的寡糖链由多种糖基转移酶共同作用下合成，合成的寡糖链经过寡糖转移酶(OST)转移到新合成的多肽链上形成糖肽，糖肽被转运到高尔基体作进一步的修饰形成功能型糖蛋白。当编码参与糖基化过程的糖基转移酶的基因发生缺陷，就会导致正常的糖基转移酶活性降低或者无法被合成，进一步导致功能型的糖蛋白合成的量不足或无法合成，这一变化会影响个体的正常生命活动，甚至导致个体的死亡。这一由编码糖基转移酶的基因缺陷而引起的遗传性疾病被称为先天性糖基化缺陷(CDG)。ALG1(asparagine-linkedglycosylation 1)、PMM2(Phosphomannomutase 2)基因分别编码了β1,4甘露糖基转移酶、磷酸甘露糖变位酶2，它们参与内质网蛋白质N-糖基化，其中磷酸甘露糖变位酶2参与甘露糖基转移酶的供体(鸟苷二磷酸甘露糖(GDP-mannose))的合成，甘露糖基转移酶参与内质网寡糖链的合成。ALG1-CDG、PMM2-CDG分别为由编码上述两种酶的基因突变而引起的先天性糖基化缺陷(CDG)，均属于先天性糖基化缺陷家族。先天性糖基化缺陷的确诊患者数量在逐年上升，目前对于这类遗传性疾病仍没有很好的治疗方法。除此之外，由于该遗传病不具有典型的临床症状，因此难以被诊断，这也导致许多患者没有被正确的诊断和报道。

2015年，ErikA.Eklund等人通过分析病人的血液样本时，从ALG1-CDG、PMM2-CDG病人血清中的转铁蛋白上发现由两个N-乙酰氨基葡萄糖，一个半乳糖，一个唾液酸(Sia-Gal-Gn2：Neu5Ac-Gal-GlcNAc2)构成的四糖，并将这一具有标志性的寡糖链作为ALG1-CDG、PMM2-CDG的生物标记物。这一发现对研究ALG1-CDG、PMM2-CDG的生理生化特性以及后续的临床诊断奠定了基础。目前，最常用的诊断方法主要是基于基因组学的基因组测序和全外显子测序。随着糖组学的发展，基于糖组学的等电聚焦、质谱等方法也被应用到糖基化缺陷的检测中。

目前，尽管对于先天性糖基化缺陷的诊断方法取得了一定的进步，但是现存的这些方法仍存在着许多的不足。首先，这些方法对于样品处理的要求较高，这导致检测耗时较长，甚至出现漏诊，同时也产生了较高的费用；其次，这些方法无法确定具体的治病基因，最终的确诊还需做进一步的检测。因此，研制出一种高效，准确，低花费的诊断方法极为重要。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种ALG1-CDG、PMM2-CDG生物标记物的合成方法。