[发明专利]查尔酮荧光探针及其制备方法与应用、床旁快速检测尿蛋白方法

说明书

本发明公开了查尔酮荧光探针及其制备方法与应用、床旁快速检测尿蛋白方法。所述查尔酮荧光探针的结构式如下所示：本发明通过延长共轭结构得到与蛋白结合后发光红移的查尔酮荧光探针，其发光峰可避免尿液自发光干扰。利用简单的拍摄工具，以自身尿液荧光作为参比，分析加探针尿样与尿液自发光的荧光色差，可实现对蛋白尿床旁快速检测，根据色差标准曲线可快速获得蛋白尿含量是否异常。本发明成本低、响应快速、抗干扰性能优异、可视化效果好，非常符合床旁快速检测的要求。

技术领域

本发明属于床旁快速检测技术领域，具体涉及一种查尔酮荧光探针及其制备方法与应用、床旁快速检测尿蛋白方法。

背景技术

尽管白蛋白(ALB)是人血浆中含量最丰富的蛋白质(35～55g/L)，但经肾脏滤过和重吸收作用后，尿液中ALB含量通常保持在极低的水平。白蛋白尿是指尿液中ALB含量异常升高(30mg/L)，是肾小球病态的高蛋白渗透性所致的肾脏病理状况。在临床上，尿蛋白已被认为是多种疾病的重要早期生物标志物，包括糖尿病性肾小球硬化症，血管疾病，多囊肾疾病，急性肾衰竭和肿瘤。根据改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)的最新指南，A2级白蛋白尿(ALB含量：30～300mg/L，即微量白蛋白尿)可能预示着无症状患者的肾功能下降或早期肾损伤；A3级白蛋白尿(ALB含量：300mg/L，即大量白蛋白尿)则极有可能与肾病综合症相关。因此，床旁快速检测尿液中ALB含量对于白蛋白尿的初步筛查、病症早期诊断、慢性病患者居家自查等具有重要意义。

临床检测方法包括免疫分析、量油尺测试、毛细管电泳、液相色谱、微流控设备等，但这些方法大多需要较长的测样时间，且仪器设备较昂贵，因此不适用床旁快速检测。已有专利CN201510227239.7、CN201711382457.3等给出基于免疫比浊法的微量蛋白尿检测试剂盒，专利CN201110458518.6等给出基于胶体金的检测试剂盒。与上述方法相比，荧光检测法是一种响应速度快、灵敏度高、可视化效果好的方法，近年来在生物分析、医学等领域引起广泛关注。迄今为止，已有基于分子转子、AIEgens、环境敏感荧光分子等荧光探针被设计用于ALB检测，尽管已报道荧光探针在纯水或血清样品中表现出与临床BCG方法相当的ALB检测性能(CN201910316642.5)，但大多数已报道探针无法准确检测真实尿液样品中的ALB，这是因为尿液代谢物(例如4-吡哆酸、3-羟基-2-氨基苯甲酸)发出的蓝色荧光严重干扰探针的发光信号。已有专利CN201611230229.X使用稀土荧光微球(镧系元素螯合物)的长衰减时间，通过时间分辨荧光测试避免自发光干扰，但该方法需使用成本较高的稀土元素及大型时间分辨光谱仪器。

因此，现有技术仍有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种查尔酮荧光探针及其制备方法与应用、床旁快速检测尿蛋白方法，旨在解决现有荧光探针无法避免尿液自发光的干扰的问题。

本发明的技术方案如下：

一种查尔酮荧光探针，其中，所述查尔酮荧光探针的结构式如下所示：

一种本发明所述的查尔酮荧光探针的制备方法，其中，包括步骤：

将2-乙酰基萘与对二甲氨基肉桂醛溶解于有机溶剂中，然后加入碱溶液，在25～80℃下反应18～24h，得到所述查尔酮荧光探针。

本发明所述的查尔酮荧光探针在床旁快速检测尿蛋白中的应用。

一种基于查尔酮荧光探针的床旁快速检测尿蛋白方法，其中，包括以下步骤：

将本发明所述查尔酮荧光探针溶解于有机溶剂中，得到探针母液；将白蛋白溶解于缓冲液中，得到蛋白母液；