[发明专利]抗CD3蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人CD3抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取CD3蛋白C末端的1‑65位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌Codon plus表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含TRX蛋白标签、CD3蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗CD3蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株33H1,以及由该细胞株所分泌的抗CD3蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD3蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗CD3蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

免疫细胞尤其是T细胞在免疫应答整个过程中处于核心地位，T细胞表面存在众多的CD分子，如CD3，CD4，CD8和CD28等，这些CD分子广泛参与了T细胞识别抗原、活化增殖或无能、凋亡及清除异体抗原或对自身抗原耐受等免疫效应全过程，在这些CD分子中，CD3分子尤为重要，它与T细胞表面的T细胞受体(TCR)组成TCR-CD3复合体，在T细胞抗原识别和免疫应答产生过程中具有极其重要的作用。

CD3分子主要分布于成熟T淋巴细胞表面，是T细胞膜上的重要分化抗原，是T细胞的特异性标志之一，平均每个T细胞有5.1×104个CD3结合部位。研究表明，CD3分子至少由γ、δ、ε、ζ、η这五条多肽链组成，它们与T细胞抗原受体(TCR)非共价紧密相连。CD3分子的主要功能为：稳定TCR结构；传递T细胞活化信号。

CD3在T细胞淋巴瘤的辅助诊断和鉴别诊断中具有重要作用。淋巴瘤是一组起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤，可分为霍奇金病(简称HD)和非霍奇金淋巴瘤(简称NHL)两大类，组织学可见淋巴细胞和(或)组织细胞的肿瘤性增生，临床以无痛性淋巴结肿大最为典型，肝脾常肿大，晚期有恶病质、发热及贫血。T细胞来源的淋巴瘤属于非霍奇金淋巴瘤。关于类型的分布，国内以非霍奇金淋巴瘤多见，占95.1％，霍奇金病占4.9％。我国霍奇金病发病率低，和日本7.6％接近，而欧美国家多见，可高达45％。非霍奇金淋巴瘤的病理类型中，我国滤泡型少见，T细胞淋巴瘤及结外淋巴瘤发病率较高，日本B细胞占44.1％，而50％以上属于T细胞来源，我国和日本淋巴癌发病率情况接近，而欧美淋巴癌大多来源于B细胞。非霍奇金淋巴瘤较霍奇金病常见，各年龄组均可发生，发病年龄最小3个月，最大82岁，男女比例成人期为2.7：1，儿童为9～13：1。

临床上，CD3免疫组化主要用于辅助诊断T细胞来源的淋巴瘤，以及T细胞淋巴瘤与B细胞淋巴瘤、恶性黑色素瘤、低分化癌的鉴别诊断。

发明内容

发明人提供了一种抗CD3蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CD3蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG2aκ亚型单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 21980的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗CD3蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含TRX蛋白标签、CD3蛋白片段及His蛋白标签。

进一步地，所述CD3蛋白片段为CD3蛋白的第23位至第126位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。