[发明专利]一种秋茄RNA的提取方法

权利要求书

1.一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于其包含以下步骤：

(1)液氮磨样：取秋茄根系或叶片，放入液氮研磨成粉末，迅速转移不少于100mg粉末至无RNA酶的第一EP管中，加600ul Buffer A，立即涡旋混匀；

所述Buffer A按重量百分比由以下组分组成：

PVP40 1％-3％，巯基乙醇1％-2％，Na₂S₂O₅1％-2％，NaCl 2％-3％，Tris 1％-1.8％，EDTA-2Na 1.5％-2％，SDS 1％-2％，余量为水溶剂，室温保存；

(2)水浴裂解：将所述第一EP管在50℃水浴30分钟，每隔10分钟颠倒20次；

(3)沉淀去杂：加200μl Buffer B，上下颠倒所述第一EP管20次，充分混合；

所述Buffer B为5M KAc溶液，保存温度4℃；

(4)低速离心：离心机预冷至4℃，所述第一EP管在5000g离心10min；

(5)取上清液：转移上清液约450μl到第二EP管，不触动沉淀；

(6)磁珠吸附：加450μl的Buffer C和25μl的磁珠，混合倒管20次，将所述第二EP管在室温孵育5分钟，轻离心1s，放置在磁力架上大约3min，直到溶液变清；吸去上清液，不触动磁珠；

所述Buffer C按重量百分比由以下组分组成：PEG8000 20％-25％，NaCl 15％-20％，余量为水溶剂，室温保存；

(7)洗涤：向所述第二EP管加入1ml Wash Solution，从所述磁力架上取下所述第二EP管，颠倒20次，轻离心1s，将所述第二EP管放置在所述磁力架上约30s，吸去上清液，不触动磁珠；

所述Wash Solution为DEPC水配置的80％EtOH，现配现用；

(8)重复步骤(7)一次；

(9)干燥：开盖，让磁珠空气干燥1-2min；

(10)洗脱：向所述第二EP管中的磁珠加80μl RNase-free ddH₂O，缓慢吸打悬浮磁珠，轻离心1s后，放置在磁力架上约2min，直到溶液变清；

(11)转移：将洗脱后的溶液转移75μl至一个新的第三EP管中，-70℃保存备用。

2.根据权利要求1所述的一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于所述秋茄根系优先选用幼嫩根系，或所述秋茄叶片为秋茄任一新鲜叶片，或所述秋茄根系或叶片为鲜样液氮速冻后保存于-70℃的样品。

3.根据权利要求2所述的一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于所述BufferA按以下组分与份量进行配制：1g PVP40，1ml巯基乙醇，1g Na₂S₂O₅，2.5g NaCl，20ml 0.5M Tris，20ml0.25M EDTA-2Na，1g SDS，加水定容至100ml。

4.根据权利要求2所述的一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于所述Buffer A按以下组分与份量进行配制：2g PVP40，2ml巯基乙醇，2g Na₂S₂O₅，3g NaCl，25ml 0.5M Tris，22ml0.25M EDTA-2Na，2g SDS，加水定容至100ml。

5.根据权利要求2所述的一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于所述Buffer A按以下组分与份量进行配制：3g PVP40，1.5ml巯基乙醇，1.5g Na₂S₂O₅，2g NaCl，30ml 0.5M Tris，24ml 0.25M EDTA-2Na，1.5g SDS，加水定容至100ml。

6.根据权利要求3或4或5所述的一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于所述Buffer C按以下组分与份量进行配制：20g PEG8000，15g NaCl，加水定容至100ml，室温保存。

7.根据权利要求6所述的一种秋茄RNA的提取方法，其特征在于在所述步骤(10)中，所述RNase-free ddH₂O在50℃预热后使用。