[发明专利]新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法

说明书

本发明属于化学发光免疫检测领域，尤其是一种新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，针对现有方法灵敏度低的问题，现提出如下方案，其包括以下步骤：将生物活性原材料包被于微孔板表面，生物活性原材料的浓度为50ng/mL，生物活性原材料包被完成后为冻干粉形式，生物活性原材料中包含10％的海藻糖；包被过程中抗原抗体磁微粒用量的确定，实验中取待测样本50μL/管，37℃温育30分钟，洗液冲洗后去上清；通过酶催化底物发光，只要样本中存在痕量的抗体，即可通过光电倍增管发现并定量判断，产品灵敏度高、宽的线性动力学范围、光信号持续时间长、分析方法简便快速，自动化程度更高，检测结果更快，适用于临床急诊。

技术领域

本发明涉及化学发光免疫检测技术领域，尤其涉及一种新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法。

背景技术

新型冠状病毒是一种可引起人肺炎/肺部感染的新的冠状病毒，它与已知可引起感冒、严重急性呼吸综合症(SARS)和中东呼吸综合症(MERS)同属一个冠状病毒家族，世界卫生组织已将其命名为2019新型冠状病毒，即2019-nCoV。专利号为202010086730.3的专利公开了一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，提供了在反应膜上包被抗原来捕捉抗体的技术，结果是通过胶体金在结合处聚集显色而定性判断，缩短了检测时间，操作简单方便。

但一种2019新型冠状病毒抗体检测试剂盒及其制备方法也存在一些问题，例如，产品的灵敏度低、线性动力学范围窄、光信号持续时间短、检测结果依旧较慢，若样本中没有足够量的抗体，则无法显示颜色，造成假阴性。

发明内容

基于背景技术存在产品的灵敏度低、线性动力学范围窄、光信号持续时间短的问题，本发明提出了新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法。

本发明提出的新型冠状病毒检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

S1、将生物活性原材料包被于微孔板表面，生物活性原材料的浓度为50ng/mL，生物活性原材料包被完成后为冻干粉形式，生物活性原材料中包含10％的海藻糖；

S2、包被有抗原抗体磁微粒用量的确定，实验中取待测样本50μL/管，37℃温育30分钟，洗液冲洗后去上清；加入检测新型冠状病毒抗体酶50μL/管，37℃温育30分钟，洗液冲洗后去上清；

S3、阴阳性对照品的调试，具体为：采用多份阴性血清，加0.05％PC300，混合均匀配制成阴性对照品，采用抗体阳性原料，经60℃条件下1小时灭活，用稀释液做适当稀释(分别按1：50、1：100、1：200、1：400、1：800)，混合均匀配制成阳性对照品；

S4、确定检测新型冠状病毒抗体酶的用量，检测新型冠状病毒抗体酶采用混合酶，混合酶包括10份－15份的辣根过氧化物酶、6份－10份的荧光微球、6份－8份的链霉亲和4份－7份的素磁微粒，发光底物液包括A液和B液；

S5、辣根过氧化物酶的活化：将15-20mg/mL的辣根过氧化物酶溶液与20-40mg/mL的过碘酸钠溶液按体积比1：1-3混匀，并在3-7℃的温度下避光反应1-2小时，制得半成品溶液；将浓度为20-40μL/mL的乙二醇水溶液与半成品溶液按照1:1混合，并在常温下避光反应20-30min，完成活化；

S6、免疫反应的加入量确定，具体如下：采用两步夹心法定量检测人血清中的新型冠状病毒抗体，检测中参与反应的是包被重组新型冠状病毒抗原和酶标记重组新型冠状病毒抗原捕获样本中的新型冠状病毒抗体；

S7、免疫结合反应温度与时间的确定，具体如下：温度：由于抗体、抗原是有活性的生物物质，温度超过一定的范围就会失去活性，通过试验在较小的范围内选择最适宜的孵育温度；

S8、洗孔体积与洗孔次数的确定，具体为：先固定洗管3次，通过改变每次注液体积，观察洗管效果。