[发明专利]尿液中18-羟皮质醇的检测方法

说明书

本发明涉及一种尿液中18‑羟皮质醇的检测方法。本发明的检测方法包括以下步骤：样品前处理：取尿液样本，与18‑羟皮质醇稳定同位素内标的工作液混合，再在所得混合液中加水稀释，混合后离心，取上清液作为待测样品溶液，注入高效液相色谱串联质谱仪测定18‑羟皮质醇的含量。本发明的检测方法前处理简单、快速、特异性强、试剂耗材成本低、易于规模化操作。

技术领域

本发明涉及18-羟皮质醇检测的技术领域，特别是涉及尿液中18-羟皮质醇的检测方法。

背景技术

原发性醛固酮增多症(Primary aldosteronism，PA)，简称原醛症，指肾上腺皮质球状带分泌过量的醛固酮而导致肾素-血管紧张素系统受抑制，导致潴钠排钾、血容量增多，以高血压伴有或不伴有低血钾为主要临床表现的综合症。原醛症是继发性高血压的常见病因之一，在高血压人群中的发病率为10％左右。研究发现醛固酮过多会导致心肌肥厚、心力衰竭和肾功能受损。原醛症主要分为6个亚型，其中醛固酮瘤(aldosterone-producingadenoma，APA)和双侧肾上腺增生(Bilateral Adrenal Hyperplasia BAH)是占比较大的两种亚型，分别占35％和60％。

国外在临床研究原醛症时发现，尿液18-羟皮质醇(18-hydroxycortisol，18-OHF)的含量在糖皮质激素可抑制性醛固酮增多症(glucocorticoid suppressiblehyperaldosteronism，GSH)、APA和BAH上无明显重叠。因此18-OHF的测定有助于PA亚型的鉴别诊断，被认为是区分APA、GSH和其他亚型的新型标志物，同时还可作为APA的手术治疗效果评估的指标。

18-OHF的传统检测方法有气相色谱质谱法(GC-MS)、放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(EIA)、时间分辨荧光法和高效液相色谱法(HPLC)，这些方法都存在前处理过程复杂且步骤繁琐，检测结果抗干扰能力差、检测耗时长、检测成本高等缺点。近年来，液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)也被运用于检测18-羟皮质醇18-OHF，相较于传统检测方法，液相色谱串联质谱法检测18-羟皮质醇具有灵敏度低、成本低、耗时短等优点。为去除样品蛋白干扰，检测前需要对样品进行前处理除杂，而目前已发表文献中所报道的前处理方法普遍为固相萃取法(Solid Phase Extraction,SPE)，但SPE方法存在步骤多、操作复杂、耗时长、试剂耗材成本高和污染环境等问题。

此外，18-OHF和6β-羟皮质醇都是人体内自然存在的化合物，两者具有相同的分子量，互为同分异构体，定量检测18-OHF时容易被内源性同分异构体6β-羟皮质醇干扰，导致18-OHF难以准确定量检测，因此需要开发出一种快速区分两种化合物以实现18-OHF准确定量检测的分析方法。

因此本领域技术人员迫切解决的一个技术问题就是：如何针对18-OHF，提供一种前处理简单、快速、特异性强、试剂耗材成本低、易于规模化操作的检测方法。

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种前处理简单、快速、特异性强、试剂耗材成本低、易于规模化操作的尿液中18-羟皮质醇的检测方法。

具体技术方案如下：

尿液中18-羟皮质醇的检测方法，包括以下步骤：

样品前处理：取尿液样本，与18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液混合，再在所得混合液中加入水稀释，混合后离心，取上清液作为待测样品溶液，注入高效液相色谱串联质谱仪测定18-羟皮质醇的含量。

在其中一些实施例中，所述18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液的溶剂为甲醇、乙腈或乙醇。

在其中一些实施例中，所述18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液的溶剂为甲醇。