[发明专利]尿液中18-羟皮质醇的检测方法

权利要求书

1.尿液中18-羟皮质醇的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

样品前处理：取尿液样本，与18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液混合，再在所得混合液中加入水稀释，混合后离心，取上清液作为待测样品溶液，注入高效液相色谱串联质谱仪测定18-羟皮质醇的含量；

所述18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液的溶剂为甲醇、乙腈或乙醇；

所述尿液样本与所述18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液的体积比为1: (1.5~2.5)，所述混合液与水的体积比为1:(1-5) ；

所述高效液相色谱串联质谱仪的色谱条件包括：

色谱柱： C18色谱柱；

柱温：（35±5）℃；

进样器温度：（15±5）℃；

进样量：（2-6）μL；

流速：0.3-0.5 mL/min；

流动相A为0.1 wt%~0.3wt%甲酸的水溶液，流动相B为0.1 wt%~0.3wt%甲酸的甲醇溶液，采用梯度洗脱；

液相洗脱梯度为：

0~1min，流动相A的体积百分比为60~80%，流动相B的体积百分比为20~40%；

1~3.5 min，流动相A的体积百分比由60~80%降低到30~40%，流动相B的体积百分比由20~40%升高到60~70%；

3.5~3.51 min，流动相A的体积百分比由30~40%降低到0~20%，流动相B的体积百分比由60~70%升高到80~100%；

3.51~4.50min，流动相A的体积百分比为0~20%，流动相B的体积百分比为80~100%；

4.50~4.60min，流动相A的体积百分比由0~20%升高到60~80%，流动相B的体积百分比由80~100%降低到20~40%；

4.60~5.50min，流动相A的体积百分比为60~80%，流动相B的体积百分比为20~40%。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液的溶剂为甲醇。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述尿液样本与所述18-羟皮质醇稳定同位素内标的工作液的体积比为1:2。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合液与水的体积比为1:(1-3)。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合液与水的体积比为3:7。

6.根据权利要求1~5任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱仪的色谱条件包括：

柱温：35 ℃；

进样器温度：15 ℃；

进样量：4μL；

流速：0.4 mL/min。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱串联质谱仪的液相洗脱梯度为：

0~1min，流动相A的体积百分比为（70±5）%，流动相B的体积百分比为（30±5）%；

1~3.5 min，流动相A的体积百分比由（70±5）%降低到（35±5）%，流动相B的体积百分比由（30±5）%升高到（65±5）%；

3.5~3.51 min，流动相A的体积百分比由（35±5）%降低到（10±5）%，流动相B的体积百分比由（65±5）%升高到（90±5）%；

3.51~4.50min，流动相A的体积百分比为（10±5）%，流动相B的体积百分比为（90±5）%；

4.50~4.60min，流动相A的体积百分比由（10±5）%升高到（70±5）%，流动相B的体积百分比由（90±5）%降低到（30±5）%；

4.60~5.50min，流动相A的体积百分比为（70±5）%，流动相B的体积百分比为（30±5）%。