[发明专利]一种间充质干细胞的分离和培养方法及制剂

权利要求书

1.一种间充质干细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

将滑膜组织剪碎，并置于完全培养基中后，再添加胶原酶溶液进行消化、震荡分层，得到沉降组织和第一上清液；

将沉降组织置于完全培养基中进行震荡分散两遍，得到上清液；

将所有上清液进行混合后，再进行过滤，得到滤液；

将滤液进行离心处理，弃上清，得到原代间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述胶原酶溶液的制备方法包括以下步骤：将胶原酶溶解于完全培养基中后，再经滤膜过滤，得到所述胶原酶溶液。

3.根据权利要求2所述的一种间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述胶原酶溶液中，胶原酶的质量与完全培养基的体积的比值以g/mL计为(0.5~1.5):100。

4.根据权利要求1~3中任一项所述的一种间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述完全培养基为添加有血清替代品和L-谷氨酰胺的Lonza无血清培养基。

5.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤中，过滤的方法为采用60~80μm的细胞滤网进行过滤。

6.一种间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

将如权利要求1~5中任一项所述分离方法得到的细胞用原代培养基进行重悬后，再进行培养、换液，弃去未贴壁细胞；

待原代细胞的融合度不低于60%时，将其进行传代培养，得到P1代细胞；

待P1代细胞的融合度不低于80%时，将其进行传代培养，直至得到单一的梭形成纤维样的P3代细胞。

7.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述原代培养基包括完全培养基和青霉素-链霉素混合液；青霉素-链霉素混合液和完全培养基的体积比为1:100。

8.根据权利要求7所述的一种间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述青霉素-链霉素混合液的浓度为10000单位/mL。

9.根据权利要求7所述的一种间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述培养方法还包括以下步骤：取3D微载片作为培养的微载体；

用胰酶替代物对P3代细胞进行消化，得到细胞悬液；

将微载体置于完全培养基进行分散后，再添加细胞悬液进行培养；

培养结束后，添加载体裂解液将细胞洗脱下来，收集液体，经离心得到3D扩增培养的间充质干细胞。

10.一种如权利要求6~9中任一项所述培养方法得到的制剂。