[发明专利]一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种枯草芽孢杆菌菌剂，属于微生物技术领域，具体，所述的枯草芽孢杆菌为JQ‑0101D，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏时间：2021年3月19号，保藏登记号为CGMCC No.22039。本发明对该菌进行培养发酵，形制成菌剂，其菌剂能有效抑制腐霉属、疫霉属、镰刀属，对五加科人参属植物根腐病有良好的生防作用，并对酸杆菌生长繁殖有一定促进效果。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

连作障碍，是指连续在同一土壤上栽培同种作物或近缘作物引起的作物生长发育异常。症状一般为生长发育不良，产量、品质下降，极端情况下，局部死苗，不发苗或发苗不旺；多数受害植物根系发生褐变、分支减少，活力低下，分布范围狭小，导致吸收水分、养分的能力下降。

人参、西洋参是严重忌连作药用植物，用重茬地继续栽种人参一般在第2年以后存苗率降至30％以下，有大约70％土地上的人参须根脱落、烧须，根周皮烂红色、长满病疤，致使人参地上部分死亡，有的地块几乎全部绝苗。因此，老参地连作障碍问题成为一直困扰参业发展的重大技术难题。三七生长环境特殊，种植区域受限，且存在严重的连作障碍。同为五加科人参属的三七连作最突出的表现是“病多，产量低”，连作地根腐病的发病率平均为23．9％，相当于新栽地的3．5倍，且随着连作年限延长，根腐病发病越重。连作表现为植株基本全部死亡，缩短轮作年限则表现为发病严重和保苗率低等现象，致使产量低、质量差。

目前为解决连作障碍最简单的方式就是轮作，换地种植，但是人参、西洋参和田七均为多年生草本植物，为实现轮作，吉林省平均每年要砍伐7 000多hm²森林，抚松、靖宇、集安等老参区已基本无林可伐；虽然栽(种)参的同时还林，但由于树种单一，造成生物多样性丧失、水土流失明显增加、涵养水源能力降低、土壤肥力下降、森林生态平衡失调等一系列生态问题，对长白山的生态环境已构成严重威胁。

发明内容

针对现有技术中存在的，五加科人参属的人参、西洋参和三七存在严重的连作障碍的问题，本发明提供一种枯草芽孢杆菌菌剂，以及其制备方法，能够在一定程度上缓解五加科人参属经济作物的连作障碍问题。

一种枯草芽孢杆菌菌剂，由枯草芽孢杆菌经种子活化、种子培养、发酵培养后制成的菌剂，所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为JQ-0101D，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏时间：2021年3月19号，保藏登记号为CGMCC No.22039。

其中，所述的菌剂优选为液体菌剂。

同时，本发明提供该菌剂的制备方法，具体如下：

a .菌种活化：将低温保存的枯草芽孢杆菌菌株接种于固体培养基上，于35-38℃培养34-38h，挑取单菌落转接到斜面培养基上，于35-38℃培养16-24h，用无菌水洗下培养基表面菌体作为接种液；

b .一级种子液制备：按照5％-10％的接种量向种子培养基中接入步骤a制备的接种液，转速200-260rpm，温度35-38℃，摇床培养16-24h，作为一级种子液；

c.二级种子液制备：按照0.5％-3％的接种量向种子培养基中接入步骤b制备的一级种子液，通气量为0.4-1.5vvm，搅拌速度为180-260rpm，培养时间为18-24h，作为二级种子液；

d .发酵培养：按照5％-10％的接种量向发酵培养基中接入步骤c制备的二级种子液，通气量为0.4-1.5vvm，搅拌速度为180rpm-260rpm，培养时间为24h-30h，得到发酵液；

e .将上述发酵液通过水洗和分子筛浓缩，得到枯草芽孢杆菌液体菌剂。