[发明专利]一种基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取扩增方法

权利要求书

1.一种基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）黄瓜果实的切碎与裂解；

（2）滤膜片的制备与基因DNA吸附；

（3）滤膜片的清洗；

（4）滤膜片吸附DNA在PCR反应液中的洗脱；

（5）PCR扩增与产物电泳。

2. 根据权利要求1所述的基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取方法，其特征在于：所述黄瓜果实的裂解液配制方法：800mM 盐酸胍，50mM Tris[pH 8]，0.5% Triton X100，1%Tween-20。

3. 根据权利要求3所述的基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取方法，其特征在于： 所述黄瓜果实的裂解方法，取黄瓜果实表皮、表层果肉或者中心果肉10-100mg，放入小管中，用镊子捏碎，直至无明显大块果实，加入100μL裂解液，充分混匀，室温孵育1分钟。

4.根据权利要求2所述的基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取方法，其特征在于：所述滤膜片的选择制备与DNA吸附，滤膜片的基本性质：纤维素含量≥98%，孔径≈10μm，厚度≈200μm，过滤速度≈150s，将滤膜片裁剪成2-3mm直径的圆片，放入黄瓜组织裂解液中，室温孵育1分钟。

5.根据权利要求4所述的基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取方法，其特征在于：所述滤膜片的清洗，清洗液配方：10mM Tris[pH 8]，1% Tween-20，将吸附有基因DNA的滤膜片放入盛有清洗液的小管中，室温孵育1分钟。

6.根据权利要求5所述的基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取方法，其特征在于：所述滤膜片吸附DNA的洗脱，清洗后的滤膜片放入PCR混合液中，室温孵育1分钟，黄瓜基因DNA直接洗脱在PCR混合液中，PCR混合液包括进行PCR反应的必要成分和扩增目的基因的引物。

7.根据权利要求6所述的基于膜吸附的黄瓜基因DNA快速提取方法，其特征在于：所述PCR扩增与产物电泳，滤膜片吸附DNA在PCR混合液中洗脱后，去除滤膜片，根据目的基因选择扩增参数，直接进行PCR反应，反应产物进行电泳分析。