[发明专利]一种用于海水鱼的链球菌联合疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于生物疫苗技术领域，公开了一种用于海水鱼的链球菌联合疫苗及其制备方法，所述用于海水鱼的链球菌联合疫苗按质量份数计，由灭活链球菌浓缩液65～80份、佐剂15～30份和辅剂3～5份组成；所述灭活链球菌浓缩液的细菌浓度＞50×10⁸cfu/mL；所述链球菌包括海豚链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和格氏乳球菌中的任意两种或两种以上。本发明链球菌联合疫苗的组分配伍设计科学合理，使用安全，接种方便，无药物残留，免疫预防效果显著，大大提高了免疫效率和接种疫苗剂量准确性。同时，本发明提供的用于海水鱼的链球菌联合疫苗的制备方法操作简单，成本低廉，可广泛用于海水鱼链球菌病的预防，具有良好的市场应用前景。

技术领域

本发明属于生物疫苗技术领域，更具体地，本发明尤其涉及一种用于海水鱼的链球菌联合疫苗及其制备方法。

背景技术

目前，随着海水鱼规模化、集约化养殖的快速发展和养殖环境的日益恶化，病害频繁暴发，尤其是细菌性疾病流行范围广、传染性强、发病率和死亡率高，其中，以链球菌感染最为流行，在全球的主要鱼类养殖国家均有发生，危及各种海淡水养殖鱼类，并且有逐年递增的趋势，其危害日益凸显，据统计，全球每年渔业因链球菌病所造成的经济损失至少超过1.5亿美元，造成了巨大的经济损失。病害的暴发与随之带来的食品安全问题已成为制约我国海水鱼产业健康持续发展的瓶颈。然而，目前缺乏一套行之有效的防治手段，化学药物只能在疾病的早期起到控制病情的辅助性作用，而且药物的使用容易导致耐药的产生和环境污染及食品的药物残留。经长期对海水鱼类病害的研究发现，海豚链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和格氏乳球菌是是引起海水鱼类链球菌病的主要病原菌，而且常多种病原混合感染。然而目前所研究开发的链球菌疫苗存在免疫原种类和作用对象单一、抗链球菌种类专一、免疫保护率低下及免疫持续期短等多方面的问题，使其在生产上的应用受到了极大的限制。疫苗免疫是预防和控制海水鱼链球菌病流行与传播最为有效、安全和环保的方法之一，故亟需一种新的能够用于海水鱼的链球菌联合疫苗及其制备方法。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前缺乏一套行之有效的方案预防和治疗该病，药物只能在早期起到控制病情的辅助性作用，但随着耐药和抗药性的产生和积累，该病的现状几乎是“无药可治可防”。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于海水鱼的链球菌联合疫苗及其制备方法。

本发明是这样实现的，一种用于海水鱼的链球菌联合疫苗的制备方法，所述用于海水鱼的链球菌联合疫苗的制备方法包括以下步骤：

步骤一，按照质量份数称取牛脑浸粉3～5份、牛心浸粉3～5份、酪蛋白胨6～8份、蛋白胨4～6份、酵母粉1-2份、葡萄糖2～3份、氯化钠4～5份、磷酸氢二钠2～3份、琼脂12～15份、无菌蒸馏水1000份，混合后搅拌均匀得到混合物料；将混合物料进行加热直至充分溶解，高温灭菌后进行静置、冷却，得到脑心浸液琼脂培养基；将分离自发病海水鱼体内并具有强毒力和良好免疫原性的海豚链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和格氏乳球菌分别接种至脑心浸液琼脂培养基中进行培养；

步骤二，将步骤一所述脑心浸液琼脂培养基上培养好的菌苔接种于高压灭菌且盛有500mL脑心浸液培养基的锥形瓶中，在振荡摇床中进行小体积的液体活化培养；所述在振荡摇床中进行小体积的液体活化培养的条件为：设置小体积的液体活化培养的温度为28±0.5℃，摇床转速为120～180r/min，活化培养时间为20～24h；

步骤三，将步骤二得到的活化培养好的菌体按照2～4％的比例接种于生物反应器中已经高压灭菌的30L发酵培养基中通气搅拌培养，当链球菌生长到10⁸或10⁹CFU/mL时，停止发酵反应；所述将活化培养好的菌体接种于生物反应器中已经高压灭菌的发酵培养基中通气搅拌培养的条件为：于温度为28±0.5℃、通气量为100～150L/min的条件下搅拌培养12～14h；