[发明专利]猪伪狂犬病变异病毒毒株及其应用

说明书

本申请提供了猪伪狂犬病变异病毒毒株及其应用，属于病毒分子生物学和基因工程领域技术领域。通过在某猪场PRV病发体中分离的病毒，经PCR鉴定、测序和毒力测试，确认属于PRV强毒，命名为PRV SD2020株，以该毒株为亲本，利用基因编辑技术(CRISPR/CAS9系统)敲除其gI‑gE基因和TK基因，构建了双基因所失株PRV SD2020ΔgI‑gE和三基因缺失株PRV SD2020ΔgI‑gE‑TK。将这两个基因缺失株制备灭活疫苗和活疫苗，免疫攻毒保护试验结果表明所制备的疫苗具有良好的好安全性和免疫原性，表明该两个毒株适用于伪狂犬疾病防控和净化。

技术领域

本申请属于病毒分子生物学和基因工程领域技术领域，更具体地，涉及一种猪伪狂犬病变异病毒毒株及其应用。

背景技术

伪狂犬病是伪狂犬病病毒(以下简称PRV)引起的一种猪的以瘙痒、发热和脑脊髓炎神经症状等为特征的重要传染病，是当前危害养猪业的最为严重的传染病之一，在世界范围内广泛流行，每年给世界养猪业造成巨大的经济损失。由于该病毒同时可以感染多种家畜(猪、牛、绵羊、山羊、犬、兔、马等)和野生动物(狐、狼、鼠、蝙蝠、鹿、熊、野猪等)，该病是典型的自然疫源性疾病。因为猪是其唯一的自然携带者，部分大猪潜伏感染长期带毒并间歇排毒，成为猪群的传染源。主要通过接触传播，可通过空气、水和污染的媒介传播，也可通过胎盘和精液传播，鼠、猫、狗等野生或者家养哺乳动物也可传播该病。该病最早报道于1902年，90年代后呈世界性分存，尤其是猪群密集的地区。Bartha-K61疫苗株的使用，曾经有效的控制了RPV的病毒的传播，但并没有阻断感染。大多数欧洲国家、美国和新西兰通过免疫净化已经清除了饲养猪群中的经典PRV感染。

PRV属于疱疹病毒目，疱疹病毒科，α疱疹病毒亚科，水痘-带状病毒属，PRV是双链DNA病毒，基因组全长约150kb，可编码7～100个基因，毒力相关基因有TK，糖蛋白gC、gI、gE、gG等。PRV当前只有一个血清型，但不同毒株的生物学特性和毒力强弱不同，2011年以来我国东北、华东和华南新出现的PRV变异毒株，对免疫过PRV经典疫苗的猪场造成严重的经济损失，表现为母猪流产、产死胎和木乃伊胎，仔猪中枢神经症状、呼吸困难、高死亡率，生长育肥猪呼吸道疾病，偶尔也有发生死亡，实验室确诊为PRV野毒感染，流行病学调查结果表明，PRV变异毒株毒力基因gI、gE等发生多个位点插入或突变，主要抗原基因gB、gC和gD也发生了多个位点的插入、缺失和点突变，导致中和和抗体发生突变；免疫攻毒保护试研究表明，传统的Bartha K61株疫苗能对PRV经典毒株(如Ea株)等提供良好的免疫保护，但对流行病毒的变异株仅能提供部分保护，这与临床上免疫过Bartha K61疫苗的猪屡屡发生RPV感染现象一致。

因此，构建以变异毒株为基础的疫苗侯选株，通过加强免疫、区分感染和免疫策略(DIVA)，逐步建立净化猪群，才能有效的控制PRV变异株侵袭，最终净化PRV感染。

发明内容

本申请的目的包括，例如，提供一种猪伪狂犬病变异病毒毒株及其在制备猪伪狂犬病疫苗上的应用，以至少改善部分上述问题。

本申请的实施例可以这样实现：

一方面，本申请实施例提供一种猪伪狂犬病变异病毒毒株，命名为PRV SD2020株，PRV SD2020毒株的gB、gC、gD、gI、gE和TK基因序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。

另一方面，以PRV SD2020毒株为基础进行改造，使其上的gI/gE双基因片段缺失，以构建新的猪伪狂犬病变异病毒基因工程毒株。

在一些实施例中，PRV SD2020株缺失gI/gE片段为2907bp，构建了新的猪伪狂犬病变异病毒基因工程毒株，命名为PRV SD2020ΔgI/gE株，PRV SD2020ΔgI/gE株的保藏信息如下：

保藏编号：NO:V202150