[发明专利]一种NKG2A纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种NKG2A纳米抗体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明所述NKG2A纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。采用本发明提供的NKG2A纳米抗体能够特异性结合NKG2A蛋白，灵敏度为0.532μg/ml，可用于免疫组织化学和WesternBlotting法检测组织中NKG2A的表达，为NKG2A基因功能的研究提供方法。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种NKG2A纳米抗体及其应用。

背景技术

骆驼科动物(羊驼、骆驼)和软骨鱼体内的一种天然缺失重链但仍然具有生物活性的特异性抗体称单域抗体，单域抗体的抗原结合位点(VHH)具有独立的抗原识别能力，独立表达的VHH又被称为纳米抗体。与传统的四联体抗体相比，纳米抗体的主要特点有：分子量小，结构简单，理化性质稳定等。纳米抗体的优良特性使其在多种方面具有优势：在抗体进入机体方面，纳米抗体能够穿过动物机体内的一些保护性屏障进入发病部位发挥作用，如血脑屏障、血睾屏障等；在抗原抗体结合方面，能够结合一些隐蔽的抗原表位，特别适用于比较难得到抗体的靶点，如GPCR、离子通道和酶活中心等；在降低生产成本方面，纳米抗体结构简单易于体外表达，同时体外表达不易产生包涵体，生产工艺简单。

NKG2A是NKG2家族中的“抑制性”成员，主要表达在CD56hiNK细胞、NKT细胞和CD8+αβT细胞亚群中。非经典MHC I类分子HLA-E是NKG2A-CD94的主要配体，表达水平比经典MHC I类分子低约25倍，在大多数正常组织中都有表达，NKG2A与HLA-E的相互作用能抑制NK细胞和T细胞的激活。NKG2A抑制剂能促进T细胞和NK细胞的抗肿瘤能力，有望和现有的免疫疗法互补，更好地治疗癌症患者。同时，更多肿瘤相关免疫检查点的开发对于给癌症患者提供选择尤为重要，而NKG2A是多种肿瘤如黑素瘤的免疫检查点。目前，还没有特异性结合NKG2A蛋白的纳米抗体的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种NKG2A纳米抗体及其应用。本发明所述NKG2A纳米抗体固有的分子量小、理化特征稳定、亲和力高和结构简单易于重组表达制备，能够穿过血脑屏障，在疾病的诊断与治疗中有较大的应用前景。采用本发明提供的NKG2A纳米抗体能够特异性结合NKG2A蛋白，灵敏度为0.532μg/ml，可用于免疫组织化学和Western Blotting法检测组织中NKG2A的表达。

本发明提供了一种NKG2A纳米抗体，所述NKG2A纳米抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

优选的是，编码所述NKG2A纳米抗体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了上述技术方案所述NKG2A纳米抗体在制备结合NKG2A蛋白的药物中的应用。

本发明还提供了上述技术方案所述的NKG2A纳米抗体在制备结合NKG2A蛋白的免疫组织化学试剂中的应用。

本发明还提供了上述技术方案所述的NKG2A纳米抗体在制备结合NKG2A蛋白的WesternBlotting检测试剂中的应用。

本发明提供了一种NKG2A纳米抗体及其应用。利用噬菌体展示技术进行淘筛，噬菌体展示技术能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，进而通过亲和富集法筛选表达有特异性蛋白质的噬菌体。本发明采用噬菌体展示实验技术研发的NKG2A纳米抗体能够特异性结合NKG2A蛋白，对NKG2A蛋白的灵敏度为0.532μg/ml，可用于免疫组织化学和Western Blotting法检测组织中NKG2A的表达。

附图说明

图1为本发明提供的Western Blotting对纯化的NKG2A-VHH-His检测；

图2为本发明提供的考马斯亮蓝检测纯化的NKG2A-VHH检测；