[发明专利]美国白蛾不同性别成虫荧光定量内参基因及其引物和应用

说明书

本发明公开了美国白蛾不同性别成虫的荧光定量内参基因及其引物和应用，属于林业昆虫分子生物学领域。该荧光定量内参基因为RPL13和RPS15基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明通过美国白蛾的转录组测序数据库，选择了常用作内参基因的8个候选内参基因，通过5种算法评估候选内参基因的稳定性，获得了美国白蛾不同性别成虫的荧光定量内参基因，并设计了内参基因的实时荧光定量PCR引物，该引物特异性强，扩增效率高。本申请填补了美国白蛾不同性别成虫下没有合适内参基因的现状，为美国白蛾不同性别实验条件下的相关功能基因的表达定量提供了可靠的分析依据。

技术领域

本发明属于林业昆虫分子生物学领域。具体涉及美国白蛾不同性别成虫荧光定量内参基因及其引物和应用。

背景技术

美国白蛾(Hyphantria cunea(Drury))属属鳞翅目Lepidortera，灯蛾科Arctiidae，是世界性检疫害虫，被我国列入首批外来入侵物种之一。寄主广泛，具有食性杂、传播快、危害猖獗等特点。其主要危害果树、行道树和观赏树木，尤以阔叶树为重，包括糖槭、桑、榆、臭椿、花曲柳、山楂、杏、法国梧桐等。以取食叶片为害，严重影响植物的正常生长果蔬产量和质量等。同时对园林树木、经济林、农田防护林等造成严重的危害，以及对城市环境绿化和美化、经济发展、生态人文景观等发展具有巨大的影响。为了能够防治和应对这种世界性检疫害虫，就需要对美国白蛾进行研究，了解其生物学特性以及生活习性。

实时荧光定量(Reverse transcription quantitative polymerase chainreaction，RT-qPCR)是功能基因表达量的一种精确的定量方法，但它依赖于合适的内参基因对功能基因的相对表达定量进行数据标准化。内参基因必须在特定的实验条件下稳定表达。美国白蛾雌、雄成虫之间存在明显的生物学差异。因此，利用实时荧光定量方法探究美国白蛾不同性别成虫下功能基因的差异表达分析，就需要稳定可靠的内参基因。因此，有必要对该害虫不同性别成虫下的内参基因稳定性进行筛选，否则无法对该害虫不同性别成虫功能基因的相对表达定量进行研究。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供不同性别成虫的荧光定量内参基因，满足实时荧光定量分析美国白蛾转录表达水平的要求，为不同性别成虫下的相关功能基因的表达定量提供可靠的分析依据；本发明所要解决的另一技术问题是提供美国白蛾不同性别成虫的荧光定量内参基因的引物；本发明所要解决的再一技术问题是提供上述基因及其引物在美国白蛾不同性别成虫荧光定量中的应用。

为了解决上述问题，本发明采用的技术方案为：

美国白蛾不同性别成虫的荧光定量内参基因，为RPL13和RPS15，其中，RPL13基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，RPS15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的美国白蛾不同性别成虫的荧光定量内参基因的引物，RPS13基因的引物序列如下：

RPL13正向引物：5′-TCCATTAAGGCCGGTTGTCC-3′；

RPL13反向引物：5′-AGGATCCACTGCAATGCCAA-3′。

所述的美国白蛾不同性别成虫的荧光定量内参基因的引物，RPS15基因的引物序列如下：

RPS15正向引物：5′-GCGTCACTCTCAAGATCAGC-3′；

RPS15反向引物：5′-ATGGTGCAGATCCTCCAGTC-3′。

上述内参基因在美国白蛾不同性别成虫荧光定量中的应用。

RPL13基因的引物序列在美国白蛾不同性别成虫荧光定量中的应用。

RPS15基因的引物序列在美国白蛾不同性别成虫荧光定量中的应用。