[发明专利]一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液

说明书

本发明公开了一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，在人和动物细胞内存在大量小分子修饰的蛋白，尤其是受到类泛素分子修饰的蛋白，为提高其检测效率，通过优化调整动物细胞裂解缓冲液各成分组成比例，并创新性的加入相关试剂成分，以及改变完善细胞裂解流程，能高度有效裂解各种动物原生代细胞和传代培养细胞，并为后期实验，包括蛋白鉴定，蛋白纯化，抗体制备等实验，提供良好的实验用前期蛋白样品。

技术领域

本发明属于细胞检测技术领域，具体涉及一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液。

背景技术

细胞内存在多种类泛素小蛋白分子，包括Ubiquitin,SUMO,ISG 等，它们在细胞内通过级联反应，共价连接到底物蛋白分子上，从而调控底物蛋白的分子功能。因此，准确高效的鉴定受到类泛素分子修饰的蛋白底物在生物医学基础科研和临床实践中有重要意义。

常用于鉴定细胞内受到类泛素分子修饰的蛋白的技术方法主要有免疫印迹，免疫共沉淀，蛋白纯化。然而，所有这些实验技术的实施，均建立在获得适合的细胞蛋白样品的基础之上。到目前为止，广泛用于细胞蛋白样品制备的细胞裂解缓冲液均可高效裂解细胞。然而，由于细胞内受到类泛素分子修饰的蛋白仅占到该蛋白总量的0.1～5％，甚至更低，并且通常处于动态的修饰和去修饰平衡当中；同时，由于细胞内存在大量的去类泛素修饰酶类，这些酶类在细胞裂解的同时可导致已发生类泛素修饰的蛋白去类泛素化，从而导致应用这些细胞裂解缓冲液获得的细胞蛋白样品大多数情况下只能检测到未被类泛素修饰的蛋白，而不能检测到受到类泛素分子修饰的蛋白。

因此，如何通过优化创新细胞裂解缓冲液的组成成分，使之既能高效裂解细胞，又能有效的在后续实验中检测到极低含量的受到类泛素分子修饰的底物蛋白，就成为一个迫切需要解决的现实问题。

发明内容

为了解决上述提到的技术问题，本发明设计了一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，通过以下方法实现：

一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，其特征在于，包括：Tris–HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐)、NaCl、Sodium dodecyl sulfate(SDS，十二烷基硫酸钠)、EDTA(乙二胺四乙酸)、Nonidet P-40(乙基苯基聚乙二醇)、Sodium deoxycholate(脱氧胆酸钠)、Dithiothreitol(DTT,二硫苏糖醇)、MG-132(蛋白酶体抑制剂)中的几种，由上述的几种搭配组成缓冲液；

优选的，所述缓冲液由48-52mM Tris–HCl、148-152mM NaCl、 0.5-1.5％Sodiumdodecyl sulfate、4-6mM EDTA组成；

优选的，所述Tris–HCl 50mM、NaCl 150mM、1％Sodium dodecyl sulfate、5mMEDTA组成缓冲液1；Tris–HCl的PH为7.4；

优选的，所述缓冲液由48-52mM Tris–HCl、148-152mM NaCl、 4-6mM EDTA、1.5-2.5％Nonidet P-40、0.5-1％Sodium deoxycholate、 8-12mM Dithiothreitol、8-12uMMG-132、95-105ug/ml Protease inhibitor；

优选的，所述Tris–HCl 50mM、NaCl 150mM、EDTA 5mM、2％ Nonidet P-40、0.5％Sodium deoxycholate、10mM Dithiothreitol、 10uM MG-132、100ug/ml Proteaseinhibitor组成缓冲液2；Tris –HCl的PH为7.8；

一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液对细胞裂解的方法为：