[发明专利]一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液

权利要求书

1.一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，其特征在于，包括：Tris–HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐)、NaCl、Sodium dodecyl sulfate(SDS，十二烷基硫酸钠)、EDTA(乙二胺四乙酸)、Nonidet P-40(乙基苯基聚乙二醇)、Sodium deoxycholate(脱氧胆酸钠)、Dithiothreitol(DTT,二硫苏糖醇)、MG-132中的几种，由上述的几种搭配组成缓冲液。

2.根据权利要求1所述一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，其特征在于，所述缓冲液由48-52mM Tris–HCl、148-152mM NaCl、0.5-1.5％Sodium dodecylsulfate、4-6mM EDTA组成。

3.根据权利要求2所述一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，其特征在于，所述Tris–HCl 50mM、NaCl 150mM、1％Sodium dodecyl sulfate、5mMEDTA组成缓冲液1；Tris–HCl的PH为7.4。

4.根据权利要求1所述一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，其特征在于，所述缓冲液由48-52mM Tris–HCl、148-152mM NaCl、4-6mM EDTA、1.5-2.5％Nonidet P-40、0.5-1％Sodium deoxycholate、8-12mM Dithiothreitol、8-12uM MG-132、95-105ug/ml Protease inhibitor。

5.根据权利要求5所述一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液，其特征在于，所述Tris–HCl 50mM、NaCl 150mM、EDTA 5mM、2％Nonidet P-40、0.5％Sodiumdeoxycholate、10mM Dithiothreitol、10uM MG-132、100ug/ml Protease inhibitor组成缓冲液2；Tris–HCl的PH为7.8。

6.一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液对细胞裂解的方法为：

S1：3x10⁶原代细胞或培养细胞通过细胞离心机离心后，收集在1.5ml离心管内，收集2管；

S2：向S1中的离心管加入100ul本发明的缓冲液1，充分振荡打散后置于95℃水浴保持15min后立即取出置于冰上15min；

S3：向S2中的离心管加入900ul本发明的缓冲液2，充分摇晃均匀，存放于-80℃中保存；

S4：后期鉴定实验。

7.根据权利要求6所述一种用于检测细胞类泛素修饰蛋白的新型细胞裂解缓冲液对细胞裂解的方法，其特征在于，所述S1中细胞离心收集的方法为：使用离心机转速500，离心2分钟，去上清液后用PBS缓冲液洗涤细胞1次，再次离心，转速500，离心时间2分钟，去上清液后细胞沉淀后进行收集。