[发明专利]抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明属于病毒检测、诊断领域，涉及抗SARS‑CoV‑2病毒核衣壳蛋白的单克隆抗体及其制备方法和用途。本发明提供了抗SARS‑CoV‑2病毒核衣壳蛋白的单克隆抗体、其重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。本发明提供的抗SARS‑CoV‑2病毒核衣壳蛋白单克隆抗体能够特异性地与核衣壳蛋白结合。本发明提供的抗SARS‑CoV‑2病毒核衣壳蛋白单克隆抗体为SARS‑CoV‑2病毒检测和诊断提供了可能和便利。

技术领域

本发明属于病毒免疫检测领域，尤其是涉及抗SARS-CoV-2病毒核衣壳蛋白的单克隆抗体。本发明还涉及该抗SARS-CoV-2病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备方法以及它们的用途。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病原体SARS-CoV-2病毒，又称2019新型冠状病毒(2019 Novel coronavirus,2019-nCoV)，SARS-CoV-2病毒是一类单股正链的RNA病毒。它的基因组长度约三万个核苷酸左右。它的四个主要结构蛋白是刺突糖蛋白(S蛋白)、小包膜蛋白(E蛋白)、基质蛋白(M蛋白)和核衣壳蛋白(N蛋白)。N蛋白与病毒基因组RNA相互缠绕形成病毒核衣壳，在病毒RNA的合成过程中发挥着重要的作用。同时， N蛋白相对保守，在病毒的结构蛋白中所占比例最大。而N蛋白是病毒的主要抗原,诱导机体产生强的免疫应答,在冠状病毒的发病机理和免疫学诊断上有重要作用。N蛋白是 SARS-CoV-2病毒抗原抗体检测的潜在重要靶标。N蛋白的GenBank登录号为 QHD43423.2，该蛋白由419个氨基酸组成，分子量是45.6KD。

目前国内外常用的针对SARS-CoV-2病毒的检测方法主要有两种：(1)应用荧光定量RT-PCR等检测病毒RNA；(2)应用重组N蛋白或重组S蛋白及其片段检测SARS-CoV-2 病毒抗体。通过RT-PCR检测病毒RNA比较敏感,对SARS-CoV-2早期病原诊断有一定价值，但是RT-PCR方法容易发生样品交叉污染而出现假阳性结果。病人血液里的IgM 抗体通常在感染7d后出现，14d出现高峰，所以抗体检测显然不适用于早期诊断。因此，寻找快速有效的诊断方法，早期发现、早期治疗就十分重要。双抗体夹心法检测病毒具有灵敏度高，特异性好等优点，是SARS-CoV-2病毒早期检测的理想指标。但目前市场上没有用于SARS-CoV-2病毒抗原检测诊断产品，主要原因是SARS-CoV-2病毒是新型病毒，尚没有合格的用于开发SARS-CoV-2病毒抗原检测的抗体原料。为此，我们制备的抗 SARS-CoV-2N蛋白的单克隆抗体，为开发SARS-CoV-2病毒抗原检测试剂盒奠定基础。

发明内容

在一方面，本发明提供了一种抗SARS-CoV-2病毒核衣壳蛋白的单克隆抗体或其功能片段，所述抗体或其功能片段包含重链可变区和轻链可变区，其中

(a)所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，

所述HCDR1包含选自SEQ ID NO:16、22、28、34、40、46或52所示的氨基酸序列或所示氨基酸序列包含至多三个(例如，一个、二个或三个)氨基酸突变的变体；所述HCDR2 包含选自SEQ ID NO:17、23、29、35、41、47或53所示的氨基酸序列或所示氨基酸序列包含至多三个氨基酸突变的变体；所述HCDR3包含选自SEQ ID NO:18、24、30、36、42、48 或54所示的氨基酸序列或所示氨基酸序列包含至多三个氨基酸突变的变体；以及

(b)所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，

所述LCDR1序列包含选自SEQ ID NO:19、25、31、37、43、49或55所示的氨基酸序列或所示氨基酸序列包含至多三个氨基酸突变的变体；所述LCDR2序列包含选自SEQ ID NO:20、26、32、38、44、50或56所示的氨基酸序列或所示氨基酸序列包含至多三个氨基酸突变的变体；所述LCDR3序列包含选自SEQ ID NO:21、27、33、39、45、51或57所示的氨基酸序列或所示氨基酸序列包含至多三个氨基酸突变的变体。