[发明专利]表达趋化因子受体的具有实体肿瘤定向趋化能力的单核细胞和巨噬细胞、及其制备和应用

说明书

本发明提供了一种表达趋化因子受体的具有实体肿瘤定向趋化能力的单核细胞和巨噬细胞、及其制备和应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种巨噬细胞，该巨噬细胞过表达趋化因子受体，具有向实体肿瘤趋化迁移的能力以及显著的向肿瘤趋化迁移和浸润的效果，能够提高过继移植巨噬细胞的特异性杀伤效率和利用率，降低对正常组织的非特异性免疫攻击。本发明提供了一种巨噬细胞的制备方法，包括构建含有趋化因子受体基因的慢病毒表达体系，利用慢病毒表达体系将趋化因子受体基因整合到多能干细胞或者单核巨噬细胞中，经诱导分化后制备得到巨噬细胞，该巨噬细胞能够长期稳定的过表达趋化因子受体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种表达趋化因子受体的具有实体肿瘤定向趋化能力的单核细胞和巨噬细胞、及其制备和应用。

背景技术

CAR-T是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，在血液肿瘤中起到了较好的治疗效果，但由于受到脱靶效应和肿瘤微环境抑制因素的影响，其在各类实体瘤的治疗中仍不理想。因此针对实体肿瘤的免疫治疗急需找到更加有效和安全的替代者。Macrophage由于在过继性免疫系统和先天性免疫系统的相互作用中起着核心作用，且具备较强的可塑性和在肿瘤组织中长时间驻存等方面的特性，正在成为实体肿瘤免疫细胞治疗的新选择。另外，已有研究试图通过颅内注射的方式将CAR-T等免疫细胞输送到肿瘤灶，以期达到治疗的目的。然而该方法可操作性较差。因此，针对胶质母细胞瘤(GBM)等实体肿瘤的治疗探索出一种新的递送过继移植Macrophage的方式就成了肿瘤免疫细胞治疗的关键。

在实体肿瘤免疫细胞治疗的过程中，过继移植免疫细胞的有效递送和对肿瘤组织的浸润是制约治疗效果的关键。例如，胶质母细胞瘤(GBM)位于机体大脑内部，受到血脑屏障和细胞外致密的基质的阻扰，传统的过继移植免疫细胞往往很难递送到肿瘤病发灶。因此开发出过继免疫细胞新的递送方式就成为包括脑癌在内的实体肿瘤治疗的关键一环。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种巨噬细胞，该巨噬细胞具有向实体肿瘤组织趋化迁移的能力，能够提高继移植巨噬细胞的特异性杀伤效率和利用率，以解决上述问题中的至少一种。

本发明的第二目的在于提供一种巨噬细胞的制备方法。

本发明的第三目的在于提供一种多能干细胞。

本发明的第四目的在于提供一种单核巨噬细胞。

本发明的第五目的在于提供一种单核细胞。

本发明的第六目的在于提供一种巨噬细胞、多能干细胞或单核巨噬细胞在制备用于治疗肿瘤的产品中的应用。

本发明的第七目的在于提供一种用于治疗肿瘤的产品。

第一方面，本发明提供了一种巨噬细胞，所述巨噬细胞过表达趋化因子受体。

作为进一步技术方案，所述趋化因子受体包括CCR2B、CCR5、CCR9、CX3CR3、CXCR1、CXCR2、CXCR4、CCR1、CCR3、CCR4、CCR6、CCR7、CCR8、CCR10、XCR1、CXCR3、CXCR5或CXCR6中的至少一种。

作为进一步技术方案，所述巨噬细胞由多能干细胞、单核细胞或者单核巨噬细胞分化得到。

作为进一步技术方案，所述多能干细胞、单核细胞和单核巨噬细胞含有编码所述趋化因子受体的基因。

第二方面，本发明提供了一种巨噬细胞的制备方法，包括如下步骤：构建含有趋化因子受体基因的慢病毒表达体系，利用慢病毒表达体系将趋化因子受体基因整合到多能干细胞或者单核巨噬细胞中，经诱导分化后制备得到巨噬细胞；

优选地，所述多能干细胞先诱导分化为单核细胞，再分化得到巨噬细胞。