[发明专利]一种高效液相色谱串联质谱检测全血中免疫抑制剂的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱串联质谱检测全血中免疫抑制剂的检测试剂盒，其特征在于，含有内标液，所述内标液中含有添加剂，所述添加剂为维生素E；所述免疫抑制剂为环孢霉素A、他克莫司、西罗莫司和依维莫司中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述维生素E的浓度为0.5-1.5mg/mL。

3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述内标液中还含有同位素标记的免疫抑制剂和乙腈，其中环孢霉素A的内标为同位素标记的环孢霉素A，他克莫司的内标为同位素标记的他克莫司，西罗莫司和依维莫司的内标都为同位素标记的西罗莫司；所述内标液以乙腈为溶剂。

4.如权利要求1-3任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还含有内标稀释液，所述内标稀释液包括七水合硫酸锌、纯化水和甲醇；所述内标稀释液中，纯化水和甲醇的体积比为3:7，七水合硫酸锌的含量为60mM；所述内标液和内标稀释液的体积比为1：24。

5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括系统适用性溶液，所述系统适用性溶液包含环孢霉素A、他克莫司、西罗莫司、依维莫司中的一种或多种，以及同位素标记的环孢霉素A、他克莫司和西罗莫司中的一种或多种，还包含溶剂和添加剂，所述溶剂为含添加剂的乙腈，所述添加剂为维生素E。

6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括标准样品、质控样品和液相色谱流动相；所述标准样品和质控样品采用含基质添加剂的无菌牛血作为基质配制；所述基质添加剂中含有维生素E；所述标准样品为含有标准浓度的环孢霉素A、他克莫司、西罗莫司、依维莫司中的任意一种或多种的样品；所述质控样品为含有低中高三个不同水平浓度的样品；所述液相色谱流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为2mM乙酸铵-0.1%甲酸水溶液，流动相B为2mM乙酸铵-0.1%甲酸甲醇溶液。

7.一种检测全血中的免疫抑制剂的方法，其特征在于，采用如权利要求1-6任一项所述的检测试剂盒进行检测；包括系统适用性测试、样品制备、样品前处理和样品检测；其中，所述样品前处理包括以下步骤：取内标液和内标稀释液以体积比1：24的比例混匀，得到内标工作液；取样品与内标工作液按照体积比1∶3~1∶7混匀，离心，取上清进行高效液相色谱串联质谱检测；所述免疫抑制剂为环孢霉素A、他克莫司、西罗莫司和依维莫司中的一种或多种。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，样品检测过程中，以同位素标记的西罗莫司作为依维莫司的内标，从而检测依维莫司的含量。

9.维生素E用于制备免疫抑制剂溶液的稳定剂的用途，所述免疫抑制剂为环孢霉素A、他克莫司、西罗莫司和依维莫司中的一种或多种。