[发明专利]一种促进葫芦子叶再生的培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种促进葫芦子叶再生的培养基，包括下述成分：MS培养基、终浓度为1.0mg/ml的6‑BA、终质量分数为3％的蔗糖和终质量分数为0.68％的琼脂；其中，6‑BA为PhytoTech Lab品牌的6‑BA；以该培养基进行子叶再生，方法包括：无菌苗培养、切割和组织培养。该培养基提高了子叶再生芽的数量。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体地说是涉及一种促进葫芦子叶再生的培养基及其应用。

背景技术

葫芦，又名瓠瓜、瓠子、扁蒲，是葫芦科葫芦属一年生草本植物。葫芦根系发达，下胚轴粗壮，不空心，适用于西瓜、甜瓜和黄瓜等瓜类作物的砧木，以克服生产中的连作障碍。葫芦砧木与其他瓜类作物共生亲和性强，成活率高，是研究瓜类嫁接亲和特性的模式作物。同时，葫芦也是研究植物开花与性别分化的模式植物。欲利用遗传转化手段，研究葫芦重要性状，首先需要建立高频的再生系统。

子叶是众多植物高频再生的主要外植体，但是葫芦子叶再生困难，属于组织培养顽拗型作物。多有学者利用葫芦叶芽进行培养。叶芽已经是分化成熟的器官，容易再生，但是不利于转化。培养基成分是植物再生系统的重要组成部分，目前，大多数学者仅将侧重点放在培养基的组分上，但是，其实子叶的切割方式在很大程度上决定着子叶伤口的分布形态，进而影响子叶再生；而目前，还没有相关人员对子叶的切割方式进行研究以促进葫芦子叶的再生。

因此，如何提供一种促进葫芦子叶再生的子叶切割方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种促进葫芦子叶再生的培养基，并将该培养基应用于促进葫芦子叶再生中，提高了子叶再生芽的数量。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种促进葫芦子叶再生的培养基，包括下述成分：1×MS培养基、终浓度为1.0mg/ml的6-BA、终质量分数为3％的蔗糖和终质量分数为0.68％的琼脂；其中，6-BA为PhytoTechLab品牌的6-BA。

所述的促进葫芦子叶再生的培养基在促进葫芦子叶再生中的应用。

一种促进葫芦子叶再生的方法，包括下述步骤：

1)无菌苗培养：选择饱满的葫芦种子，剥除种皮，对种仁杀菌，并接入琼脂培养基中，暗培养3-5天，获得无菌苗；

2)切割：将步骤1)所得无菌苗进行切割，获得外植体；

3)组织培养：将步骤2)所得外植体接入再生培养基中培养，每隔7天进行一次换代培养，培养40天，得葫芦子叶再生芽。

作为本发明优选的技术方案，步骤1)中，所述对种仁杀菌为先以浓度为2％的次氯酸钠灭菌10-15min，再以无菌水清洗3次，每次清洗5min。

作为本发明优选的技术方案，步骤1)中，所述琼脂培养基包括：琼脂粉0.5-0.8g和水100ml。

作为本发明优选的技术方案，步骤2)中所述切割包括下述过程：

21)固定葫芦无菌苗胚根，并切去子叶顶部叶缘，切去部分约占子叶长度的1/6；

22)在步骤1)的基础上，切去子叶两侧叶缘，切去部分约占子叶宽度的1/6；

23)在步骤2)的基础上，切去子叶基部和叶芽部分，切去部分约占子叶长度的1/6，剩下的部分即为子叶外植体；

24)沿着平行和垂直子叶主叶脉的方向，将子叶外植体平均分为4块子叶外植体，完成子叶的切割。

作为本发明优选的技术方案，步骤3)中，所述外植体接入再生培养基时的初始密度为25个外植体/培养基；待培养两周后，将接种密度调整为15个外植体/培养基。