[发明专利]一种促进葫芦子叶再生的培养基及其应用

权利要求书

1.一种促进葫芦子叶再生的培养基，其特征在于，包括下述成分：MS培养基、终浓度为1.0mg/ml的6-BA、终质量分数为3％的蔗糖和终质量分数为0.68％的琼脂；其中，6-BA为PhytoTechLab品牌的6-BA。

2.权利要求1所述的促进葫芦子叶再生的培养基在促进葫芦子叶再生中的应用。

3.一种促进葫芦子叶再生的方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)无菌苗培养：选择饱满的葫芦种子，剥除种皮，对种仁杀菌，并接入琼脂培养基中，暗培养3-5天，获得无菌苗；

2)切割：将步骤1)所得无菌苗进行切割，获得外植体；

3)组织培养：将步骤2)所得外植体接入再生培养基中培养，每隔7天进行一次换代培养，培养40天，得葫芦子叶再生芽。

4.根据权利要求3所述的一种促进葫芦子叶再生的方法，其特征在于，步骤1)中，所述对种仁杀菌为先以浓度为2％的次氯酸钠灭菌10-15min，再以无菌水清洗3次，每次清洗5min。

5.根据权利要求3所述的一种促进葫芦子叶再生的方法，其特征在于，步骤1)中，所述琼脂培养基包括：琼脂粉0.5-0.8g和水100ml。

6.根据权利要求3所述的一种促进葫芦子叶再生的方法，其特征在于，步骤2)中所述切割包括下述过程：

21)固定葫芦无菌苗胚根，并切去子叶顶部叶缘，切去部分约占子叶长度的1/6；

22)在步骤1)的基础上，切去子叶两侧叶缘，切去部分约占子叶宽度的1/6；

23)在步骤2)的基础上，切去子叶基部和叶芽部分，切去部分约占子叶长度的1/6，剩下的部分即为子叶外植体；

24)沿着平行和垂直子叶主叶脉的方向，将子叶外植体平均分为4块子叶外植体，完成子叶的切割。

7.根据权利要求3所述的一种促进葫芦子叶再生的方法，其特征在于，步骤3)中，所述外植体接入再生培养基时的初始密度为25个外植体/培养基；待培养两周后，将接种密度调整为15个外植体/培养基。

8.根据权利要求3所述的一种促进葫芦子叶再生的方法，其特征在于，步骤3)中，所述培养的条件为温度25±1℃、光照强度3000lux、光照/黑暗周期16h/8h。