[发明专利]人血清中25羟基维生素D含量检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了高效液相色谱串联质谱技术检测人血清中25羟基维生素D的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：T1.洗脱液：洗脱液A：体积比为0.1％甲酸水溶液；洗脱液B：乙腈，HPLC‑MS级。人血清中25羟基维生素D含量检测方法，包括采用前处理的人血清中25羟基维生素D，S1、利用高效液相色谱将25羟基维生素D与干扰物分离；S2、利用同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立标准曲线；S3、计算待测样本中25羟基维生素D的含量。本发明特异性强，灵敏度高，前处理过程简单，精密度和加标回收率都基本符合要求，可以用于检测人血清中25羟基维生素D2和25羟基维生素D3的含量。

技术领域

本发明涉及血清检测技术领域，尤其涉及人血清中25羟基维生素D含量检测方法以及检测时使用的试剂盒。

背景技术

维生素D是一种类固醇衍生物，在人体钙磷代谢中起至关重要的作用。此外，研究表明维生素D与2型糖尿病、乳腺癌、高血压等疾病有着密切关系。维生素D在肝脏中转化为25羟基维生素D，这是维生素D在体内的主要存在形式。25羟基维生素D在肾中代谢成1，25二羟基维生素D，这是维生素D的生理活性形式。通常所说的维生素D指的是维生素D3和维生素D2，后者主要存在于植物性食物中。目前，维生素D缺乏是一个日益严重的全球性问题，全球有近10亿人维生素D不足或缺乏，这使得佝偻病、软骨病和骨质疏松等疾病的发病率居高不下。因此准确检测人体中维生素D含量对于维生素D缺乏疾病的预防和干预越来越受到重视。

常规的25羟基维生素D的检测方法主要为免疫法。然而免疫法由于存在交叉反应导致特异性差，使得检测结果准确度不佳。大规模人群数据表明，大部分免疫学方法的结果与美国国家标准与技术研究院(NIST)测定结果偏倚在-30％～40％范围波动。近年来，液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)由于其特异性好，灵敏度高，准确度佳等优点被越来越多的实验室用于临床检测领域。因此，开发一套前处理简便，灵敏度高的LC-MS/MS方法用于检测人体25羟基维生素D的含量显得十分必要，为此，我们提出人血清中25羟基维生素D含量检测方法及试剂盒来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的问题，而提出的人血清中25羟基维生素D含量检测方法及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

高效液相色谱串联质谱技术检测人血清中25羟基维生素D的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：

T1.洗脱液：

洗脱液A：体积比为0.1％甲酸水溶液；

洗脱液B：乙腈，HPLC-MS级；

T2.标准品母液：

配制：精确称取1mg 25羟基维生素D3标准品和1mg 25羟基维生素D2标准品，用少量甲醇溶解后用乙腈定容至10ml，得到100ug/ml 25羟基维生素D标准品母液；

T3.内标液：

配制：精确称取1mg d3-25羟基维生素D3标准品和1mg d3-25羟基维生素D2标准品，用少量甲醇溶解后用乙腈定容至10ml，得到100ug/ml d3-25羟基维生素D内标母液；

T4.稀释液：

稀释液1：1g牛血清白蛋白用水溶解定容至100ml制得；

稀释液2：乙腈；

T5.萃取液：正己烷

T6.质控品：25羟基维生素D的空白替代血清溶液，分低QC(L)、中QC(M)、高QC(H)浓度，浓度分别为：2ng/ml、40ng/ml、80ng/ml；取0.1ml 25羟基维生素D标准品母液，用乙腈稀释定容至10ml得1μg/ml 25羟基维生素D标准品溶液；