[发明专利]人血清中25羟基维生素D含量检测方法及试剂盒

权利要求书

1.高效液相色谱串联质谱技术检测人血清中25羟基维生素D的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：

T1.洗脱液：

洗脱液A：体积比为0.1％甲酸水溶液；

洗脱液B：乙腈，HPLC-MS级；

T2.标准品母液：

配制：精确称取1mg 25羟基维生素D3标准品和1mg 25羟基维生素D2标准品，用少量甲醇溶解后用乙腈定容至10ml，得到100ug/ml 25羟基维生素D标准品母液；

T3.内标液：

配制：精确称取1mg d3-25羟基维生素D3标准品和1mg d3-25羟基维生素D2标准品，用少量甲醇溶解后用乙腈定容至10ml，得到100ug/ml d3-25羟基维生素D内标母液；

T4.稀释液：

稀释液1：1g牛血清白蛋白用水溶解定容至100ml制得；

稀释液2：乙腈；

T5.萃取液：正己烷

T6.质控品：25羟基维生素D的空白替代血清溶液，分低QC(L)、中QC(M)、高QC(H)浓度，浓度分别为：2ng/ml、40ng/ml、80ng/ml；取0.1ml 25羟基维生素D标准品母液，用乙腈稀释定容至10ml得1μg/ml 25羟基维生素D标准品溶液；

QC(L)：取20μl 1ug/ml的25羟基维生素D标准品母液，用稀释液1定容至10ml；

QC(M)：取400μl 1ug/ml的25羟基维生素D标准品母液，用稀释液1定容至10ml；

QC(H)：取800μl 1ug/ml的25羟基维生素D标准品母液，用稀释液1定容至10ml；

T7.复溶溶剂：体积比为80％甲醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术检测人血清中25羟基维生素D的试剂盒，其特征在于，空白替代血清溶液采用1g牛血清白蛋白用水溶解定容至100ml制得。

3.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术检测人血清中25羟基维生素D的试剂盒，其特征在于，所述标准品母液配制：精确称取1mg 25羟基维生素D3标准品和1mg 25羟基维生素D2标准品，用少量甲醇溶解后用乙腈定容至10ml得到100ug/ml 25羟基维生素D标准品母液；

取0.1ml 25羟基维生素D标准品母液，用乙腈稀释定容至10ml得1μg/ml 25羟基维生素D标准品溶液，分别取10μl，20μl，50μl，100μl，200μl，500μl，1000μl的浓度为1μg/ml25羟基维生素D标准品溶液于7个10ml容量瓶，用空白血清基质溶液定容至刻度，得浓度为1ng/ml，2ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml的7个25羟基维生素D校准浓度溶液，接着分别取300μl的7个25羟基维生素D校准浓度溶液于7个2ml离心管，每管中加入1.2ml内标溶液，涡旋振荡1min后，13000r/min离心10min，取全部上清液至另一2ml离心管，50℃氮气流下吹干，残余物中加入200ul的水复溶，向其中加入1000ul正己烷涡旋萃取5min，移出有机相至另一2ml离心管室温吹干，向残余物中加入100ul 80％的甲醇水，涡旋1min，进样10μl上机检测。

4.人血清中25羟基维生素D含量检测方法，包括采用前处理的人血清中25羟基维生素D，其特征在于：

S1、利用高效液相色谱将25羟基维生素D与干扰物分离；

S2、利用同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立标准曲线；

S3、，计算待测样本中25羟基维生素D的含量。