[发明专利]基于lux报告系统的猪链球菌发光菌及其构建方法有效
申请号: | 202110667595.6 | 申请日: | 2021-06-16 |
公开(公告)号: | CN113403243B | 公开(公告)日: | 2022-07-19 |
发明(设计)人: | 刘鹏;黄文华;江华;律清宇;孔德聪;李倩;姜永强;郑玉玲 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/53;C12N15/65;C12N15/74;A61K49/00;C12R1/46 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 张立娜 |
地址: | 100850 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 lux 报告 系统 链球菌 发光 及其 构建 方法 | ||
1.一种猪链球菌发光菌,是将荧光素酶报告系统敲入片段定点插入到猪链球菌的基因组中SSU05_0518基因和SSU05_0519基因之间后得到的;
所述荧光素酶报告系统敲入片段自5’端到3’端依次包含表达盒1、表达盒2和表达盒3;所述表达盒1用于表达荧光素酶报告系统的基因簇luxAB;所述表达盒2用于表达荧光素酶报告系统的基因簇luxCDE;所述表达盒3用于表达抗性标记基因;
在所述表达盒2中,启动所述基因簇luxCDE转录的启动子为CP25G启动子;所述CP25G启动子是以CP25启动子为基础,经改造后得到的带有AGGAGG序列的启动子;
所述CP25G启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.1的第3437-3573位所示;
在所述表达盒1中,启动所述基因簇luxAB转录的启动子为147AGGAGG启动子或1647AGGAGG启动子或1647启动子;
所述147AGGAG启动子为以猪链球菌基因组中SSU05_0147基因启动子为基础,,经改造后得到的带有AGGAGG序列的启动子;所述1647AGGAGG启动子为以猪链球菌基因组中SSU05_1647基因启动子为基础,经改造后得到的带有AGGAGG序列的启动子;所述1647启动子为猪链球菌基因组中SSU05_1647基因启动子;
所述147AGGAGG启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.1的第1171-1351位所示;所述1647AGGAGG启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.2的第1171-1282位所示;所述1647启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.3的第1171-1271位所示。
2.根据权利要求1所述的猪链球菌发光菌,其特征在于:所述荧光素酶报告系统敲入片段取代了猪链球菌的基因组中SEQ ID No.4所示序列的第1350-1424位。
3.根据权利要求1所述的猪链球菌发光菌,其特征在于:所述猪链球菌发光菌是按照包括如下步骤的方法制备得到的:利用同源重组将所述荧光素酶报告系统敲入片段定点插入到猪链球菌的SSU05_0518基因和SSU05_0519基因之间,即得所述猪链球菌发光菌。
4.根据权利要求3所述的猪链球菌发光菌,其特征在于:进行所述同源重组时,采用的上游同源臂的序列如SEQ ID No.1的第1-1170位所示,下游同源臂的序列如SEQ ID No.1的第8147-9379位所示。
5.根据权利要求4所述的猪链球菌发光菌,其特征在于:所述猪链球菌发光菌是按照包括如下任一步骤的方法制备得到的:
P1、将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的DNA片段导入猪链球菌,通过同源重组实现所述荧光素酶报告系统敲入片段定点插入猪链球菌的SSU05_0518基因和SSU05_0519基因之间,得到所述猪链球菌发光菌;
P2、将核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的DNA片段导入猪链球菌,通过同源重组实现所述荧光素酶报告系统敲入片段定点插入猪链球菌的SSU05_0518基因和SSU05_0519基因之间,得到所述猪链球菌发光菌;
P3、将核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的DNA片段导入猪链球菌,通过同源重组实现所述荧光素酶报告系统敲入片段定点插入猪链球菌的SSU05_0518基因和SSU05_0519基因之间,得到所述猪链球菌发光菌。
6.根据权利要求1-5中任一所述的猪链球菌发光菌,其特征在于:所述猪链球菌为2型猪链球菌。
7.根据权利要求6所述的猪链球菌发光菌,其特征在于:所述2型猪链球菌为猪链球菌05ZYH33。
8.一种构建猪链球菌发光菌的方法,包括权利要求3-5任一中所述的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述猪链球菌为2型猪链球菌。
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