[发明专利]一种调节重组蛋白羟基化水平的方法

说明书

本发明涉及一种调节重组蛋白羟基化水平的方法，该方法包括如下步骤：在表达重组蛋白的细胞中，降低PLOD蛋白的表达或功能；其中，所述重组蛋白不为所述PLOD蛋白。本发明提供的方法可以调节重组蛋白羟基化水平，从而满足生物类似药开发中的羟基化修饰调节的需要。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种调节重组蛋白羟基化水平的方法。

背景技术

重组蛋白工业生产的常用哺乳动物作为宿主细胞，CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)是工业上最常用的哺乳动物表达系统，常用于重组抗体及重组蛋白的表达和生产。尽管CHO细胞已成功地用作制造宿主细胞系统超过30年，但这些细胞系在生长速度和重组蛋白生产能力方面仍然受到一定限制。改善宿主细胞的性能，提高宿主细胞的重组蛋白表达量，一直都是重组蛋白生产领域关注的重点。

近年来，生物类似药的发展迅速，生物类似药的翻译后修饰水平与原研药一致是其中一个重要的指标。调节翻译后修饰是生物类似药开发中的难点，工业上一般采用发酵工艺的优化来调节，包括培养基及补料筛选，培养参数等，但工作量大且不一定能达到预期效果，其中，羟基化修饰比例更是通过培养工艺难以调节的一种翻译后修饰。

目前，亟待开发一种能够调节重组蛋白羟基化水平的方法，以满足生物类似药开发中的羟基化修饰调节的需要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种调节重组蛋白羟基化水平的方法。

本发明采用如下具体技术方案：

第一方面，本发明提供一种调节重组蛋白羟基化水平的方法，该方法包括如下步骤：在表达重组蛋白的细胞中，降低PLOD蛋白的表达或功能；其中，所述重组蛋白不为所述PLOD蛋白。

本发明提供的方法通过降低细胞中PLOD蛋白的表达或功能，可以降低重组蛋白的羟基化比例，从而实现对重组蛋白羟基化水平的调节。

在一些实施方式中，所述PLOD蛋白选自PLOD1、PLOD2和PLOD3中的任意一种、两种或三种。具体而言，所述PLOD蛋白为PLOD1，或为PLOD2，或为PLOD3，或为PLOD1和PLOD2，或为PLOD1和PLOD3，或为PLOD2和PLOD3，或为PLOD1、PLOD2和PLOD3。

在一些实施方式中，所述PLOD蛋白至少包括PLOD2。

在一些实施方式中，所述方法将干扰PLOD蛋白的表达或功能的抑制剂施用于表达重组蛋白的细胞中。所述抑制剂可以选自siRNA、shRNA、microRNA、反义核苷酸、核酶、编码负性突变体的核苷酸或表达载体、抗体、肽和小分子化合物。

在一些实施方式中，所述抑制剂包括针对PLOD1、PLOD2和PLOD3中的任意一种、两种或三种的siRNA。具体而言，所述抑制剂包括针对PLOD1的siRNA，或包括针对PLOD2的siRNA，或包括针对PLOD3的siRNA，或包括针对PLOD1和PLOD2的siRNA，或包括针对PLOD1和PLOD3的siRNA，或包括针对PLOD2和PLOD3的siRNA，或包括针对PLOD1、PLOD2和PLOD3的siRNA。

在一些实施方式中，所述抑制剂至少包括针对PLOD2的siRNA。

在一些实施方式中，针对PLOD1的siRNA具有如SEQ ID NO.01所示的正义链和如SEQ ID NO.02所示的反义链。

在一些实施方式中，针对PLOD2的siRNA具有如SEQ ID NO.03所示的正义链和如SEQ ID NO.04所示的反义链和/或，针对PLOD2的siRNA具有如SEQ ID NO.03所示的正义链和如SEQ ID NO.04所示的反义链、具有如SEQ ID NO.05所示的正义链和如SEQ ID NO.06所示的反义链或者具有如SEQ ID NO.07所示的正义链和如SEQ ID NO.08所示的反义链。