[发明专利]一种区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺类荧光探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺类荧光探针，其特征在于，具有如下所示结构：

2.合成如权利要求1所述的区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺类荧光探针Z1的方法，其特征在于，通过如下步骤实现：

(1)称取对羟基苯甲醇与丙烯酰氯，以碳酸钾作为缚酸剂，丙酮和水为混合溶剂，室温下进行反应，得到中间体2；

(2)将4-硝基-1,8-萘二甲酸酐溶于无水乙醇，加入氯化亚锡和催化量的浓盐酸，在回流温度下进行还原，重结晶后得到中间体4；

(3)将中间体4溶于无水乙醇中，加入过量的乙胺溶液，在回流搅拌下，进行脱水缩合反应，得到中间体5；

(4)将上述得到的中间体5溶于无水二氯甲烷中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)以及三光气，冰浴条件下进行反应，最后再加入中间体2，柱色谱分离后，得到目标荧光探针Z1。

3.如权利要求2所述的合成区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺类荧光探针Z1的方法，其特征在于，中间体5、三光气、DIPEA、DMAP、中间体2的摩尔比为1：1：6：0.5：1.2-2。

4.合成如权利要求1所述的区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺荧光类探针Z2的合成方法，其特征在于，通过如下步骤实现：

(1)首先，将4-溴-1,8-萘二甲酸酐溶于无水乙醇中，加入乙胺溶液，在回流搅拌的条件下，进行脱水缩合反应，得到中间体7；

(2)中间体7与水合肼在乙二醇单甲醚为溶剂，回流条件下，进行反应得到中间体8；

(3)将中间体8溶于3-甲基-2-丁酮中，加入催化量的浓硫酸，在回流状态下进行Fisher吲哚成环反应，得到中间体9；

(4)中间体9溶于甲醇中，分批加入硼氢化钠，在冰浴下进行还原反应，得到化合物10；

(5)将上述得到的中间体10溶于无水二氯甲烷中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)以及三光气，冰浴条件下进行反应，最后再加入中间体2，柱色谱分离后，得到目标荧光探针Z2；

5.如权利要求4所述的合成区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺荧光类探针Z2的方法，其特征在于，中间体10、三光气、DIPEA、DMAP、中间体2的摩尔比为1：1：6：0.5：1.2-2。

6.如权利要求1所述的区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺荧光类荧光探针的应用，其特征在于，将其用于非诊断目的的溶液中Cys、Hcy、GSH的区分检测或非诊断性细胞内Cys的特异成像。

7.如权利要求6所述的区分Cys、Hcy和GSH的萘酰亚胺荧光类荧光探针的应用，其特征在于，所述溶液中Cys、Hcy、GSH的区分检测方法包括以下步骤：

(1)用二甲基亚砜和水配置荧光探针Z1或Z2的储备液；用蒸馏水分别配置Cys、Hcy|和GSH溶液；

(2)将配置好的荧光探针Z1储备液分别与Cys、Hcy和GSH溶液进行混合，使用荧光分光分度计进行波长检测，检测到Cys、Hcy在535nm处出现吸收峰，而GSH没有吸收峰；而且探针Z1对Cys的响应速度快于Hcy，据此，实现Cys、Hcy、GSH的区分检测；

或将配置好的荧光探针Z2储备液分别与Cys、Hcy和GSH溶液进行混合，使用荧光分光分度计进行波长检测，检测到Cys、Hcy在565nm处出现吸收峰，而GSH没有吸收峰；而且探针Z1对Cys的响应速度快于Hcy，据此，实现的Cys、Hcy、GSH的区分检测。