[发明专利]一种将脂肪酸转化为β-羟基脂肪酸的人工生物催化剂

权利要求书

1.一种脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体，其特征在于，含有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

2.一种核苷酸，其特征在于，所述核苷酸编码如权利要求1所述脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.如权利要求1所述脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体的制备方法，其特征在于，将野生型的P450BSβ第290位的甘氨酸突变成异亮氨酸，将第170位的缬氨酸突变成异亮氨酸，将第85位的谷氨酰胺突变丙氨酸，将第78位的亮氨酸突变成丙氨酸。

4.如权利要求1所述脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建表达野生型脂肪酸羟基化酶P450BSβ的质粒，并将该质粒转化到大肠杆菌中；

通过四轮定点饱和突变，构建饱和突变库，筛选到表达能够高度区域选择性和对映体选择性氧化脂肪酸β位C-H基团的P450BSβ突变体的突变质粒；

脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体的表达及纯化。

5.根据权利要求4所述的脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体的制备方法，其特征在于，脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体的表达及纯化包括如下步骤：

将筛选到的突变质粒在LB液体培养基中过夜培养，加入TB液体培养基扩培，于对数生长期内加入血红素前体δ-氨基乙酰丙酸和IPTG诱导表达后，离心收菌；

用缓冲液将得到的菌体重悬，通过超声破碎裂解细胞，离心，获得上清液；

将上清液加入镍离子亲和柱内，使带有His标签的目的蛋白与镍离子结合，除去杂蛋白，洗脱目的蛋白，得到脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体。

6.一种生产β-羟基脂肪酸的方法，其特征在于，以C₁₁-C₁₈链长的直链饱和脂肪酸或不饱和的油酸、亚油酸作为底物，将过氧化氢作为氧化剂，以权利要求1所述的脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体为催化剂进行催化反应。

7.根据权利要求1所述的生产β-羟基脂肪酸的方法，其特征在于，所述β-羟基脂肪酸为R型β-羟基脂肪酸。

8.根据权利要求1所述的生产β-羟基脂肪酸的方法，其特征在于，催化反应以5％乙醇作为助溶剂。

9.根据权利要求1所述的脂肪酸β-羟基化酶P450BSβ突变体在合成β-羟基脂肪酸及衍生物的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，β-羟基脂肪酸及衍生物为R型1,3-脂肪二醇、S型β-氨基脂肪酸、R型β-脂肪内酯、S型β-羟基脂肪酸、S型β-脂肪内酰胺。