[发明专利]一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体的制备方法

说明书

本发明公开了一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体制剂的制备方法，包括以下步骤：S1：将间充质干细胞接种到扩增培养基进行培养；S2：收集间充质干细胞培养基，离心去除细胞碎片，过滤去除大颗粒，得到间充质干细胞培养上清；S3：用切向流超滤膜浓缩间充质干细胞培养上清，得到外泌体浓缩液；S4：对外泌体浓缩液进行过柱处理，去除杂蛋白，得到外泌体悬液；S5：将所得外泌体悬液中加入透明质酸钠制成间充质干细胞外泌体制剂。该皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体的制备方法，本发明优选人胚胎干细胞源间充质干细胞作为外泌体的来源，来源更稳定，功能更强大，能够有效控制损伤皮肤真皮层的炎性浸润。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种皮肤抗衰老用胚胎干细胞外泌体的制备方法。

背景技术

外泌体是细胞分泌的纳米级微小囊泡，直径约为30-150nm，具有脂质双层膜结构，作为一种活细胞分泌的亚细胞成分，外泌体广泛参与细胞之间的交流，并可以作为干细胞的旁分泌因子来发挥生物学效应。外泌体包含丰富的蛋白质、RNA及DNA等生物活性物质。干细胞外泌体与干细胞具有相似的生物学性能，但更加安全稳定高效，具有更强而复杂的信号分子转运和调控能力，为无细胞移植治疗的情况下实现组织再生、组织修复提供了新策略、新方法。

皮肤是人体第一大器官，作为人体的保护屏障，具有防护外来机械损伤、防止病原微生物和化学性物质入侵机体的重要作用。皮肤损伤有外力导致的机械损伤和病理损伤，例如：日常生活中皮肤损伤，糖尿病患者并发症导致的慢性难愈合病理损伤。研究表明，在皮肤损伤修复过程中抑制炎症是促进皮肤损伤修复愈合的关键。炎症是指先天免疫系统被激活，入侵的病原体攻击皮肤组织产生的反应。

目前相关研究报道表明，在治疗皮肤损伤修复中的外泌体，主要来源于脐带、骨髓、脂肪间充质干细胞，在细胞培养过程中质量不易控制，而胚胎干细胞来源的间充质干细胞外泌体拥有更高的生物活性和批次一致性，质量稳定，更适合大规模生产。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体的制备方法，解决了上述背景技术中提出的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体制剂的制备方法，包括以下步骤：

S1：将间充质干细胞接种到扩增培养基进行培养；

S2：收集间充质干细胞培养基，离心去除细胞碎片，过滤去除大颗粒，得到间充质干细胞培养上清；

S3：用切向流超滤膜浓缩间充质干细胞培养上清，得到外泌体浓缩液；

S4：对外泌体浓缩液进行过柱处理，去除杂蛋白，得到外泌体悬液；

S5：将所得外泌体悬液中加入透明质酸钠制成间充质干细胞外泌体制剂。

优选的，所述S1对间充质干细胞进行培养时，采用无血清培养基。

优选的，所述S2步骤中在细胞培养上清浓缩过程中，先后使用0.45μm 和0.22μm滤膜过滤，得到浓缩液。

优选的，所述S3步骤中超滤膜截留物质分子量大于5KD，上清液浓缩倍数为20倍。

优选的，所述S4步骤中使用的外泌体分离柱为35nm+色谱柱，能过滤35 nm以下的杂蛋白。

优选的，所述S5步骤中透明质酸钠的浓度为1％-5％。

本发明提供了一种皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体的制备方法，具备以下优点：

1、该皮肤损伤修复用间充质干细胞外泌体制剂的制备方法，本发明优选人胚胎干细胞源间充质干细胞作为外泌体的来源，相比成体组织干细胞外泌体来源更稳定，功能更强大，能够显著促进皮肤损伤修复；