[发明专利]一种与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因及其编码蛋白和应用在审
| 申请号： | 202110652691.3 | 申请日： | 2021-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN113512556A | 公开（公告）日： | 2021-10-19 |
| 发明（设计）人： | 卢山;程璐;黄娜;王强 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N9/02;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘珊珊 |
| 地址： | 210023 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 紫罗兰 合成 相关 类胡萝卜素 裂解 双加氧酶 基因 及其 编码 蛋白 应用 | ||
1.一种与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列如序列表Seq ID No:1所示。
2.一种与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因的编码蛋白，其特征在于：该编码蛋白的氨基酸序列如序列表Seq ID No:2所示。
3.根据权利要求1或2所述的胡萝卜素裂解双加氧酶基因的编码蛋白，其特征在于：类胡萝卜素裂解酶来源于辣椒。
4.一种重组表达载体，其特征在于：包括权利要求1或2所述的基因。
5.一种转化子，其特征在于：包括权利要求4所述的重组表达载体的宿主细胞。
6.根据权利要求5所述的一种转化子，其特征在于：它的宿主为微生物、植物或转基因细胞系。
7.一种与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因的获取方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，选取遵辣，应用试剂盒提取得到遵辣果实的总RNA；
步骤2，应用步骤1获得的总RNA作为反转录模板，经反转录合成cDNA第一链后，应用发转录PCR程序进行PCR扩增，以获得与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因的ORF全长，此时的与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因带有pMAL-c5x同源臂，其中：
F端引物如下：
gcgatatcgtcgacggatccATGGGGAGAAAAGAAGAAGGAGATGATGG
R端引物如下：
taattacctgcagggaattcTCACAGTTTGGCTTGTTCCAGAATT
其中，小写字母代表同源臂序列，大写字母代表引物的基因序列；
步骤3，将带有pMAL-c5x同源臂的与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因片段进行同源重组，测序后经拼接获得具有完整编码区的辣椒类与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因。
8.一种与β-紫罗兰酮合成相关的类胡萝卜素裂解双加氧酶基因的应用，其特征在于：用于辣椒类胡萝卜素代谢基因工程中β-紫罗兰酮含量的提高。
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