[发明专利]一株大黄素甲醚高产菌株谢瓦曲霉(Aspergillus chevalieri)BYST1

说明书

本发明公开了一种大黄素甲醚高产菌株，同时提供了上述菌株的获得方式以及大黄素甲醚产量分析的方法，本发明所提供的大黄素甲醚高产菌株为Aspergillus chevalieriBYST1，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC2021285，保藏日期为2021年3月26日。本发明提供了该菌株的获得方式，以及大黄素甲醚的产量分析，主要包括以下几个步骤：(1)菌株的分离纯化；(2)发酵并分离鉴定主要成分大黄素甲醚；(3)液相定量大黄素甲醚的产量；(4)利用九种不同培养基摇瓶发酵，评估大黄素甲醚的产量差异。该菌株在液体PDB培养基中发酵，大黄素甲醚的产量为28mg/L,为目前报道最高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，提供了一株大黄素甲醚高产菌株。

背景技术

大黄素甲醚，别名朱砂莲乙素；非斯酮；1,8-二羟基-3-甲氧基-6-甲基蒽醌，为金黄色针状结晶。大黄素甲醚不仅可抑制真菌的萌发生长，还可诱导作物产生抗逆保卫反应；对多数作物白粉病具有极好的防治作用，同时对霜霉病、灰霉病、炭疽病等也有较好的防效；大黄素甲醚对人畜毒性极低，对环境友好，特别适合于绿色和有机蔬菜生产的生物制剂。

目前，大黄素甲醚已经被我国自主开发为新型植物源杀菌剂，在病害防治方面作用巨大，市场经济效益好，但此种方法，与绿色经济理念背离，对植物需求量大，残渣多，且产量普遍较低，微生物发酵法主要原料葡萄糖属于可再生资源，成本较低，产品收率更高。

发明内容

本发明针对以上技术不足，提供了一株大黄素甲醚高产菌株，命名为Aspergilluschevalieri BYST1,保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2021年3月26日；保藏号：CCTCC M 2021285。本菌株为黑翅土白蚁共生菌，通过摇瓶发酵生产大黄素甲醚的产量为28mg/L，对日后投入农药生产具有重要意义。

昆虫共生菌是一类特境微生物，是许多新的活性天然产物的来源。本发明是对一株分离自黑翅土白蚁的Aspergillus chevalieri BYST1菌株制备大黄素甲醚的方法，步骤如下：

(1)BYST1菌株发酵液的制备：菌株BYST1接种于ME(生麦芽20g，蔗糖20g，蛋白胨1g，1000mL水)液体培养基中，于28℃，180r/min条件下,摇床培养3d后所得种子液再接种至其他培养基中大量发酵7d后获得发酵液。

(2)代谢物的分离纯化：减压浓缩Aspergillus chevalieri BYST1菌株发酵液经乙酸乙酯萃取后的有机层获得粗浸膏。并用二氯甲烷，甲醇体积比为(100:0、100:1、100:2、100:4、 100:8)为流动相梯度洗脱，合并相同组分分析结果，得到四个组分Fr1-Fr4。将Fr1重新装硅胶柱，再以石油醚:乙酸乙酯体系梯度，石油醚：乙酸乙酯为5:1(v/v)洗脱得到化合物 A1(320mg)。

(3)代谢物的鉴定：采用质谱(ESI-MS)和核磁共振方法(¹H-NMR、¹³C-NMR)对化合物A1进行结构鉴定,确定化合物为大黄素甲醚，其结构如下：

进一步的对发酵培养基进行筛选后，大黄素甲醚的产量可以达到28mg/L,为目前报道最高。

综上所述本发明获得一株大黄素甲醚高产菌株Aspergillus chevalieri BYST1，利用摇瓶实验，大黄素甲醚的产量达28mg/L，为目前报道最高。鉴于大黄素甲醚具有优异的防治白粉病等植物致病菌的效果，本技术发明具有良好的应用价值，特别是具备开发成高产大黄素甲醚微生物底盘细胞的潜力。

附图说明：

图1为本发明实施例提供的菌株Aspergillus chevalieri BYST1发酵主要产物大黄素甲醚的化学结构式。