[发明专利]提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法

说明书

本发明公开了一种提高哺乳动物体外受精‑胚胎移植着床成功率的方法，包括以下步骤：获取囊胚阶段的正常胚胎、培养囊胚、洗涤囊胚以及移植囊胚，其中，所述获取囊胚阶段的正常胚胎是将雌性卵细胞和精子分别放置于培养皿的卵细胞放置区和精子放置区，并且培养至囊胚阶段后，在体视显微镜下进行筛选，获取发育速度正常的胚胎。本发明通过改进体外受精培养装置和培养条件，提高了体外受精率和胚胎着床率，并且成本低效率高，这为进一步临床研究哺乳动物尤其是人类体外受精‑胚胎移植技术提供了新的方向和方法。

技术领域

本发明涉及细胞体外培养技术领域，涉及一种提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法。

背景技术

体外受精-胚胎移植技术(In vitro fertifity and embryo transfer，IVF-ET)，是提高哺乳动物受精繁殖的新技术。近些年，在医学上已经开始采用IVF-ET，通过将男性精子和女性卵子取出后，在体外受精培育成胚胎后，再将胚胎移植入女性子宫内进行受孕，以解决目前由于多种因素引起的不孕或者不易受孕的疾病。但是尽管该技术已经运用到医学领域，胚胎移植后临床妊娠率随着技术的不断进步，已经有较大提升，但是总体上成功率大约为50％左右，相对较低。而如何提高胚胎着床率，成为提高临床妊娠率的研究的重要方向之一。

早在19世纪70年代末，德国就已经采用家兔和豚鼠为实验材料，开始探索哺乳动物的体外受精技术，虽然随着体外授精技术的不断改进和创新，已经在多种哺乳动物上进行了实施和验证，但是由于哺乳动物体外受精技术受到卵细胞和体外成熟、精子的体外获能、体外受精条件等因素的影响，导致所筛选的胚胎质量差，着床率低，并且由于该技术所使用的药物中有很大部分是需要进口的药物，并且在体外受精培养时需要多次多种培养液的更换等，导致成本高、效率低等问题一直存在，这也是一直以来限制该技术在不同哺乳动物尤其是人类体外受精-胚胎移植技术的广泛应用的原因之一。因此，亟需探究一种低成本、高效率且胚胎移植着床率高的体外受精-胚胎移植方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高反刍动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，该方法通过改进体外培养装置和培养条件，提高了体外受精率和胚胎着床率，并且成本低效率高。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了一种提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，包括以下步骤：获取囊胚阶段的正常胚胎、培养囊胚、洗涤囊胚以及移植囊胚，其中，所述获取囊胚阶段的正常胚胎是将雌性卵细胞和精子分别放置于培养皿的卵细胞放置区和精子放置区，授精，并且培养至囊胚阶段后，在体视显微镜下进行筛选，获取发育速度正常的胚胎；

所述培养皿包括皿体，所述皿体中部设置S型凹槽，所述凹槽将所述皿体分为所述卵细胞放置区和所述精子放置区，所述S型凹槽两端分别与所述卵细胞放置区和所述精子放置区连通，所述卵细胞放置区用于放置雌性卵细胞，所述精子放置区用于放置正常精子，所述正常精子通过所述S型凹槽进入所述卵细胞放置区，与所述雌性卵细胞进行体外受精；

所述培养液包括以下组分：氯化钠、二水硫酸镁、氯化钾、半乳糖酸钙、磷酸二氢钾、谷氨酸、葡萄糖、酚红、庆大霉素、牛血清白蛋白、乳酸钠、柠檬酸钠、必需氨基酸和非必需氨基酸；

所述哺乳动物为啮齿类动物。

上述方案中，通过将卵细胞和精子放置于S型凹槽两个放置区中，通过S型凹槽加长精子的游动路线，以初步淘汰一些质量较差的精子。然后，通过S型凹槽到达卵细胞放置区的精子可以与卵细胞体外受精。而放置于培养皿中的培养液，经过对其各种成分及其用量的优化，可以满足体外受精的营养需求和环境需求，进而可以进一步淘汰在此条件下仍然无法满足精子和卵细胞的结合体外受精需求、质量相对不佳的精子。从而，实现能够保留下来的受精卵都是相对质量较佳的精子和卵细胞结合获取的，经过培养获取质量优质的囊胚，为后续的胚胎移植打下基础。