[发明专利]提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法

权利要求书

1.一种提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，包括以下步骤：获取囊胚阶段的正常胚胎、培养囊胚、洗涤囊胚以及移植囊胚，其中，所述获取囊胚阶段的正常胚胎是将雌性卵细胞和精子分别放置于培养皿的卵细胞放置区和精子放置区，授精，并且培养至囊胚阶段后，在体视显微镜下进行筛选，获取发育速度正常的胚胎；

所述培养皿包括皿体，所述皿体中部设置S型凹槽，所述凹槽将所述皿体分为所述卵细胞放置区和所述精子放置区，所述S型凹槽两端分别与所述卵细胞放置区和所述精子放置区连通，所述卵细胞放置区用于放置雌性卵细胞，所述精子放置区用于放置正常精子，所述正常精子通过所述S型凹槽进入所述卵细胞放置区，与所述雌性卵细胞进行体外受精；

所述培养液包括以下组分：氯化钠、二水硫酸镁、氯化钾、半乳糖酸钙、磷酸二氢钾、谷氨酸、葡萄糖、酚红、庆大霉素、牛血清白蛋白、乳酸钠、柠檬酸钠、必需氨基酸和非必需氨基酸；

所述哺乳动物为啮齿类动物。

2.如权利要求1所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，所述培养液包括以下重量份组分：氯化钠4-8份、二水硫酸镁0.05-0.12份、氯化钾0.5-1.5份、半乳糖酸钙0.1-0.25份、磷酸二氢钾0.1-0.5份、谷氨酸0.15-1.5份、葡萄糖3-5份、酚红0.01-0.05份、庆大霉素0.01-0.05份、牛血清白蛋白2-5份、乳酸钠1-3份、柠檬酸钠1-2份、必需氨基酸1.0-1.8份、非必需氨基酸0.5-0.78份以及水800-1000份。

3.如权利要求1所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，所述必需氨基酸包括赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸中一种或多种；

所述非必需氨基酸包括丙氨酸、天冬氨酸、天门氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸中的一种或多种。

4.如权利要求3所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，所述必需氨基酸中包括以下重量份的各种氨基酸：赖氨酸1-3份、色氨酸0.5-0.8份、苯丙氨酸0.5-1份、甲硫氨酸0.5-1.0份、苏氨酸2.5-3.0份、异亮氨酸1-2份、亮氨酸2.1-3.0份和缬氨酸1.5-2.0份；

所述非必需氨基酸中包括以下重量份的各种氨基酸：丙氨酸0.3-0.8份、天冬氨酸1-1.5份、天门氨酸1.6-2.5份、谷氨酸1-1.5份、甘氨酸0.1-0.5份、脯氨酸1.0-1.5份和丝氨酸0.5-1.0份。

5.如权利要求1所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，用洗涤液洗涤囊胚，所述洗涤液为含有青霉素和庆大霉素的温热生理盐水，所述青霉素和所述庆大霉素的终浓度均为0.3-0.87mM。

6.如权利要求1所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，所述S型凹槽两端分别设置第一连接孔和第二连接孔，所述第一连接孔与所述卵细胞放置区连通，所述第二连接孔和所述精子放置区连通，且所述第一连接孔的孔径小于所述第二连接孔的孔径。

7.如权利要求6所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，在体视显微镜下自所述第一连接孔周边的卵细胞放置区开始，按照S型轨迹筛选正常胚胎。

8.如权利要求7所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，所述S型轨迹平行于所述S型凹槽。

9.如权利要求1所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，所述S型凹槽两侧顶面不高于所述皿体侧面。

10.如权利要求1所述的提高哺乳动物体外受精-胚胎移植着床成功率的方法，其特征在于，培养胚囊的条件为：37℃、6％CO₂，培养1-2h。