[发明专利]用于NPTX2的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明公开了用于人神经元正五聚蛋白Ⅱ(以下简称NPTX2)的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，所述的试剂盒包括校准品、质控品、NPTX2磁微粒混悬液、NPTX2抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；所述的校准品由NPTX2抗原配置而成；所述的质控品为含有一定浓度的NPTX2抗原，由质控品稀释液配置而成；所述的NPTX2磁微粒混悬液含有一定浓度磁微粒标记的NPTX2抗体溶液。本发明的有益效果是：本发明的试剂盒具有污染小、自动化程度高、操作简单、重复性好、灵敏度高、特异性好的NPTX2快速定量检测优点。

技术领域

本发明涉及试剂盒检测技术领域，特别是用于检测人神经元正五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种中枢神经系统退行性痴呆，主要由于神经元的衰退和神经突出的减少引起，严重影响患者的生活。AD的病因及发病机制尚未阐明，特征性病理改变为β淀粉样蛋白沉积形成的细胞外老年斑和Tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经原纤维缠结，以及神经元丢失伴胶质细胞增生等。在脑脊液或血液中，β-淀粉样蛋白、Tau和NPTX2等蛋白的早期检测对于AD患者的早期发现起到非常重要的作用。NPTX2是神经元正五聚蛋白家族成员之一，此家族目前包括NPTX1、NPTX2和NPTR 3个成员，与神经突触的重塑相关。NPTX2在阿尔茨海默病患者的大脑中表达下降。NPTX2下调可导致锥体神经元-pv神经元间回路的破坏，而锥体神经元-pv神经元间回路对大脑的节律性和兴奋性的稳态非常重要。NPTX2下调作为AD发病机制中的一个重要机制，与认知功能的退化密切相关。NPTX2是一种以前未被认识的蛋白，对人类认知功能障碍和AD的进展非常重要。NPTX2被认为是预测阿尔茨海默疾病进展的较好的生物标志物。

目前可用于人神经元正五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)检测方法主要有放射免疫测定法RIA，酶联免疫法(ELISA)、免疫印迹法和免疫层析法等。这些方法均有一定的缺陷，RIA污染大，ELISA法操作过程复杂，检测时间过长，不利于实现NPTX2的自动化检测，免疫层析法检测重复性差、灵敏低。因此，目前尚需一种污染小、自动化程度高、操作简单、重复性好、灵敏度高、特异性好的NPTX2的快速定量检测试剂盒及其使用方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供用于NPTX2的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒。本发明的试剂盒具有污染小、自动化程度高、操作简单、重复性好、灵敏度高、特异性好的NPTX2快速定量检测优点。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：用于NPTX2的磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，本发明所述的试剂盒包括校准品、质控品、NPTX2磁微粒混悬液、NPTX2抗体标记物、浓缩洗液、发光底物；

所述的校准品由NPTX2抗原配置而成；

所述的质控品为含有一定浓度的NPTX2抗原，由质控品稀释液配置而成；

所述的NPTX2磁微粒包被抗体含有一定浓度磁微粒标记的NPTX2抗体溶液。

本发明所述的NPTX2磁微粒混悬液制备方法如下所示：

1)活化：20μL磁微粒原液，加入100μL的50mg/mLEDC、50mg/mL NHS，200r/min，活化0.5-1h；EDC溶液是将EDC试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到，NHS溶液是将NHS试剂溶解于pH5.0的100mM的MES缓冲液中得到；

2)洗涤：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入300μL MES缓冲液，混匀，磁架上分离弃去上清液，洗涤2次；

3)包被：加入MES缓冲液和预包被抗体，磁微粒和抗体的质量比为80:1，混匀后，室温反应8-12h；

4)封闭：将上述溶液置于磁架上分离，弃去上清液，加入100-300μL磁微粒封闭液，摇匀后，室温反应8-12h；