[发明专利]一种III型前胶原N端肽的检测试剂盒

说明书

本发明提供一种III型前胶原N端肽的检测试剂盒，属于医药试剂技术领域，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，通过制备抗体胶乳颗粒加入到试剂R2中，采用胶乳增强免疫比浊法检测血清样本中III型前胶原N端肽的含量，检测无污染、操作便捷、灵敏度高、特异性强、成本较低，且检测所需样本量少，可进行急诊样本的测定。

技术领域

本发明属于医药试剂技术领域，具体涉及一种III型前胶原N端肽( PIIINP)的检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

肝纤维化是慢性肝病的共同病理基础和向肝硬化发展的必经阶段。肝硬化是一类严重威胁人类生命和健康的恶性疾病。慢性肝病的衍化与进展, 是致病因素的不断作用和机体的免疫功能失调共同导致肝细胞损害, 纤维组织不断增生的结果。在肝纤维化阶段,其主要病理特点是胶原蛋白、蛋白多糖及粘蛋白等多种细胞外基质在肝内的过度沉积, 长期以来依赖病理组织活检, 但因有创伤和痛苦, 患者难以接受。因此，肝纤维化的早期诊断是非常重要的。

III型前胶原N端肽是Ⅲ型胶原在细胞外形成原胶原前, 被相关酶切下后进入血液中的氨基端肽,与肝组织炎症和肝细胞损伤呈一定关系，被认为是肝纤维化的良好血清学指标。目前，临床常用作诊断肝纤维化的血清标志物。

现有技术中，III型前胶原N端肽的检测方法包括时间分辨荧光免疫分析方法，放射免疫分析法，酶联免疫吸附层析和化学发光法等。时间分辨荧光免疫分析方法需要用稀有金属进行标记；放射免疫分析法有放射性污染、操作复杂、测定结果不稳定；酶联免疫分析法克服了放射性污染，但是存在酶不稳定、灵敏度不高、不适合急诊样本的检测、难以定量、自动化程度低等不足之处；化学发光法灵敏度虽高，但检测成本较高，需要特定化学发光仪，这些原因导致其应用范围较小。

发明内容

本发明所要解决的问题是克服上述现有试剂盒所存在的缺陷，提供一种胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，检测血清中III型前胶原N端肽的含量，操作便捷、灵敏度高、特异性强、成本较低，且检测所需样本量少，可进行急诊样本的测定。

为解决上述问题，本发明采取如下的技术方案：本发明所述的III型前胶原N端肽检测试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2。

所述的试剂R1包含以下浓度的组分：

缓冲液：20-100mmol/L；

无机盐离子：5-20g/L；

表面活性剂：0.1-2g/L；

促凝剂：5-30g/L

防腐剂：0.5-2g/L。

所述的试剂R2包含以下浓度的组分：

缓冲液：50-200mmol/L；

抗体胶乳颗粒10-40mg/L；

稳定剂5-20g/L；

防腐剂：0.5-2g/L。

优选地，所述的试剂R1、试剂R2中的缓冲液是TRIS缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种。

优选地，所述的试剂R1中的无机盐离子是氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种。

优选地，所述的试剂R1中的表面活性剂是吐温-20、吐温-80、皂素、B66中的一种或多种。

优选地，所述的试剂R1中的促凝剂是聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000和聚乙二醇-20000中的一种或多种。

优选地，所述的试剂R1、试剂R2中的防腐剂是PC300、NaN3中的一种。

优选地，所述的试剂R2中的稳定剂是牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种。

优选地，所述的试剂R2中的抗体胶乳颗粒制备步骤为：