[发明专利]一种III型前胶原N端肽的检测试剂盒

权利要求书

1.一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其包含独立包装的试剂R1和试剂R2，所述的试剂R1包含以下浓度的组分：

缓冲液：20-100mmol/L；

无机盐离子：5-20g/L；

表面活性剂：0.1-2g/L；

促凝剂：5-30g/L

防腐剂：0.5-2g/L；

所述的试剂R2包含以下浓度的组分：

缓冲液：50-200mmol/L；

抗体胶乳颗粒10-40mg/L；

稳定剂5-20g/L；

防腐剂：0.5-2g/L。

2.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R1、试剂R2中的缓冲液是TRIS缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R1、的无机盐离子是是氯化钠、氯化钾、氯化镁中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R1、的表面活性剂是吐温-20、吐温-80、皂素、B66中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R1、的促凝剂是聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000和聚乙二醇-20000中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R1、试剂R2中的防腐剂是PC300、NaN3中的一种。

7.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R1、试剂R2中的稳定剂是牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种III型前胶原N端肽检测试剂盒，其特征在于，试剂R2中的抗体胶乳颗粒制备步骤为：

步骤一 活化：准备300-400nm的聚苯乙烯胶乳颗粒，胶乳颗粒用20-100mM/L 2-（N-吗啡啉）乙磺酸稀释至终浓度为0.5-2%w/v得到胶乳颗粒溶液，加入10mg/L的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC），37℃ 220转/分钟偶联30分钟，即得到活化后的胶乳颗粒；

步骤二 偶联：将III型前胶原N端肽用pH7.0的5-20mM/L HEPES稀释至终浓度为0.5-2%w/v得到抗体溶液后，将抗体溶液缓慢加入到胶乳颗粒溶液中，37℃ 220转/分钟偶联180分钟；

步骤三 封闭：加入10%牛血清白蛋白溶液30mL，37℃ 220转/分钟封闭60分钟；

步骤四 储存：4℃ 10000转 离心取上清液用20-100mmol/LTRIS缓冲液重悬浮，室温搅拌1h混合均匀，得到质量体积浓度为1％的III型前胶原N端肽胶乳颗粒。