[发明专利]与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体及其衍生物、筛选方法及应用

说明书

本发明提供与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体及其衍生物、筛选方法及应用，通过该筛选方法得到的核酸适配体的核苷酸序列为：5’‑AACGAAGGTATACAAAAATATAATATAAATATCTAC TACG‑3’，该核酸适配体与FXYD2γa特异性抗体相比，具有筛选周期短，成本低，稳定易保存，可常温运输，应用广泛等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体及其衍生物、筛选方法及应用。

背景技术

核酸适配体(Aptamer)是一种经体外筛选技术-指数富集的配体系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)，得到的结构化的寡核苷酸序列(RNA或DNA)，核酸适配体与抗体功能类似，但是与抗体相比具有更多的优势，具有更高的亲和力与特异性；无免疫原性；能够化学合成，成本低；可进行标记；定性好，易于保存等优点。核酸适配体的靶分子更为广泛，包括金属离子、氨基酸、核酸、多肽、蛋白质，并从单一靶标扩展至完整的病毒颗粒及细胞等复合物靶标。因此，核酸适配体具有广泛的应用前景。

糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢性疾病，主要分为1型糖尿病，2型糖尿病，妊娠糖尿病和其他类型的糖尿病。1型糖尿病和2型糖尿病的病因都是由于分泌胰岛素的胰岛β细胞数量减少。胰岛由β细胞、α细胞、δ细胞和PP细胞组成，这些细胞与其他胰岛内分泌细胞，包括腺泡细胞和胰腺导管细胞，都有着共同的起源。因此，寻找胰岛β细胞特异性生物标记物非常困难。

基因FXYD2γ编码Na⁺-K⁺-ATP酶的调节亚基，在人体中有3个异构体：FXYD2γa，FXYD2γb和FXYD2γc。有多篇文献表明其中的FXYD2γa异构体只在人胰岛β细胞中表达。FXYD2γa最早在人胚胎15周即出现在β细胞中，与表达生长抑素的δ细胞、表达胰多肽的PP细胞无共定位，并且在人体内其他器官或细胞中表达量很低。1型糖尿病患者β细胞被自身免疫攻击破坏，数量减少。在这些患者血清中FXYD2γa相应也很低。比利时鲁汶大学的Decio L.Eizirik教授发现在胰岛移植中，核素偶联的FXYD2γa抗体能更好地监测移植β细胞的存活。因此，FXYD2γa作为胰岛β细胞的特异性标志物，可以通过检测FXYD2γa的数量从而反应胰岛β细胞的数量，从而反应糖尿病的发病机率和治疗效果。

已有FXYD2γa检测是基于抗体或其衍生物的检测方法，但是抗体不稳定、容易产生不可逆变性，批间差异大，生产时间长和成本高等缺点，现有技术还未报道过关于FXYD2γa的核酸适配体的筛选研究。

发明内容

本发明的主要目的是提供一个与人胰岛β细胞的特异性标记物FXYD2γa特异性结合的核酸适配体，旨在通过该核酸适配体进一步开发检测人胰岛β细胞的试剂盒，从而为预测和诊断糖尿病及追踪胰岛移植治疗效果提供工具，并且核酸适配体具有筛选时间短，批间差异小，稳定等优点。

为实现上述目的，本发明第一方面提出一个与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列为：5’-AACGAAGGTATACAAAAATATAATATAAATATCTACTACG-3’(SEQ ID NO.1)。

可选地，所述核酸适配体的核苷酸序列上的任一碱基被磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化或同位素化。

可选地，所述核酸适配体的核苷酸序列上结合有生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料或酶标记。

本发明第二方面提出一个与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体的衍生物，所述衍生物是第一方面所述核酸适配体的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是第一方面所述核酸适配体改造成的相应肽核酸。