[发明专利]一种多重信号放大系统及其在酶联免疫斑点法检测中的应用

权利要求书

1.一种利用多重信号放大系统进行非疾病诊断目的的酶联免疫斑点法检测的方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）固相基质上固定包被抗体或者抗原；

（2）单独加入待检测细胞，作用一段时间，去除剩余待检测细胞，洗涤；或同时加入待检测细胞和细胞刺激物，作用一段时间，去除剩余待检测细胞和细胞刺激物，洗涤；

（3）加入抗体-DNA/RNA连接链或者加入抗原-DNA/RNA连接链，作用一定时间；

（4）加入DNA/RNA放大链，作用一定时间；

（5）加入修饰物a修饰的DNA/RNA检测链，反应一定时间；

（6）加入可与修饰DNA/RNA检测链上的修饰物a特异性结合的结合物b连接的酶；

（7）加入酶的底物进行反应；

（8）定量分析固相基质上所形成的具有检测信号的免疫斑点的数量；

所述DNA/RNA连接链、DNA/RNA放大链、DNA/RNA检测链为以下序列组合中的一组或多组：

第一组：

连接链：TATTTAGTGTTCGAATAGTT，对应放大链：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；对应检测链：修饰物-TT-ATGATGATG-T-ATGATGATG-T；

第二组:

连接链：TATTTAGTGTTCGAATAGTTCGATCTAG，对应放大链：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；对应检测链：修饰物-TT-ATGATGATG-T-ATGATGATG-T;

第三组：

连接链：AATTCTATGACACCGCCACGCCCTATATCCTCGCAATAACCC； 对应放大链：GGGTTATTGCGAGGATATAGGGCGTGGCGGTGTCATAGAATT-TT-AATACTCTC-A-(AATACTCTC-A)n-AATACTCTC-A；对应检测链：修饰物-TT-GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-T；

第四组：

连接链：GTTTCCTATATTTAGCGTCCGTGTCGTTCTCCCGCGCAACAG ；对应放大链： CTGTTGCGCGGGAGAACGACACGGACGCTAAATATAGGAAAC-TT-A-CAACTTAAC-A-(CAACTTAAC-A)n-CAACTTAAC-A；对应检测链：修饰物-TT-GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-T；

第五组：

连接链：GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT； 对应放大链：ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T;

第六组：

连接链：GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT； 对应放大链：ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第七组：

连接链：CAAGTCTAGTCCAAGGTCCGTCAAGGTCTCCGACGCATACTC；对应放大链：GAGTATGCGTCGGAGACCTTGACGGACCTTGGACTAGACTTG-TT-CAATCAAAA-A-(CAATCAAAA-A)n-CAATCAAAA-A；对应检测链：修饰物-TT-TTTTGATTG-T-TTTTGATTG-T；

第八组：

连接链：AGTTCCTGTAGTATCCCGTCGCATAGTCGTACATTCACCGTC；对应放大链：GACGGTGAATGTACGACTATGCGACGGGATACTACAGGAACT-TT-CCAATAATA-A-(CCAATAATA-A)n-CCAATAATA-A；对应检测链：修饰物-TT-TATTATTGG-T-TATTATTGG-T；

第九组：

RNA连接链：AAAUUCCUCUACCACCUACA，对应一级放大链：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；对应二级放大链：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A- (TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第十组：

RNA连接链：AAAUUCCUCUACCACCUACA，对应一级放大链：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；对应二级放大链：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A- (TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T；

第十一组：

RNA连接链：AAAUUCCUCUACCACCUACAUCAC，对应一级放大链：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；对应二级放大链：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T；

第十二组：

RNA连接链：AAAUUCCUCUACCACCUACAUCAC，对应一级放大链：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；对应二级放大链：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第十三组：

DNA连接链：AAATTCCTCTACCACCTACATCAC，对应一级放大链：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；对应二级放大链：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T；

第十四组：

DNA连接链：AAATTCCTCTACCACCTACATCAC，对应一级放大链：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；对应二级放大链：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应检测链：修饰物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第十五组：

连接链：TATTTAGTGTTCGAATAGTT，对应一级放大链：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；对应二级放大链：ATGATGATG-T-ATGATGATG-T-ATGATGATG-TTT-TTTTCTACC-A-(TTTTCTACC-A)n-TTTTCTACC-A；对应检测链：修饰物-TT-GGTAGAAAA-T-GGTAGAAAA-T;

第十六组：

连接链：TATTTAGTGTTCGAATAGTTCGATCTAG，对应一级放大链：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；对应二级放大链：ATGATGATG-T-ATGATGATG-T-ATGATGATG-TTT-TTTTCTACC-A-(TTTTCTACC-A)n-TTTTCTACC-A；对应检测链：修饰物-TT-GGTAGAAAA-T-GGTAGAAAA-T;

第十七组：

连接链：AATTCTATGACACCGCCACGCCCTATATCCTCGCAATAACCC；对应一级放大链：GGGTTATTGCGAGGATATAGGGCGTGGCGGTGTCATAGAATT-TT-AATACTCTC-A-(AATACTCTC-A)n-AATACTCTC-A；对应二级放大链：GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-TTT-TCCTTTTAT-A-(TCCTTTTAT-A)n-TCCTTTTAT-A；对应检测链：修饰物-TT-ATAAAAGGA-T-ATAAAAGGA-T;

第十八组：

连接链：GTTTCCTATATTTAGCGTCCGTGTCGTTCTCCCGCGCAACAG ；对应一级放大链： CTGTTGCGCGGGAGAACGACACGGACGCTAAATATAGGAAAC-TT-A-CAACTTAAC-A-(CAACTTAAC-A)n-CAACTTAAC-A；对应二级放大链：GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-TTT-CCTTCTATT-A-(CCTTCTATT-A)n-CCTTCTATT-A；对应检测链：修饰物-TT-AATGAAAGA-T-AATGAAAGA-T

第十九组：

连接链：GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT； 对应一级放大链：ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；对应二级放大链：GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-TTT-TTATTCACT-A-TTATTCACT-A-(TTATTCACT-A)n-TTATTCACT-A；对应检测链：修饰物-TT-AGTGAATAA-T-AGTGAATAA-T

第二十组：

连接链：CAAGTCTAGTCCAAGGTCCGTCAAGGTCTCCGACGCATACTC；对应放大链：GAGTATGCGTCGGAGACCTTGACGGACCTTGGACTAGACTTG-TT-CAATCAAAA-A-(CAATCAAAA-A)n-CAATCAAAA-A；对应二级放大链：TTTTGATTG-T-TTTTGATTG-T-TTTTGATTGTTT-TCATTACTT-A-TCATTACTT-A-(TCATTACTT-A)n-TCATTACTT-A；对应检测链：修饰物-TT-AAGTAATGA-T-AAGTAATGA-T

第二十一组：

连接链：AGTTCCTGTAGTATCCCGTCGCATAGTCGTACATTCACCGTC；对应一级放大链：GACGGTGAATGTACGACTATGCGACGGGATACTACAGGAACT-TT-CCAATAATA-A-(CCAATAATA-A)n-CCAATAATA-A；对应二级放大链：TATTATTGG-T-TATTATTGG-T-TATTATTGG-TTT-TTCTTACTC-A-TTCTTACTC-A-(TTCTTACTC-A)n-TTCTTACTC-A；对应检测链：修饰物-TT-GAGTAAGAA-T-GAGTAAGAA-T；

所述n的范围为5≤n≤200；

序列从左到右为序列的5’端到3’端。