[发明专利]一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂及其应用

说明书

本发明公开了一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂，通过在体外克隆胚胎培养液中添加IL17D来抑制胚胎细胞的凋亡，进而提高克隆胚胎的发育质量，并应用于提高克隆胚胎发育质量、提高动物克隆技术效率领域、抑制体外培养胚胎细胞凋亡等领域，进而为更广泛地应用于畜牧生产、基因编辑研究等领域服务。

技术领域

本发明涉及体细胞克隆技术领域，尤其涉及一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂及其应用。

背景技术

体细胞核移植(The somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术，又称克隆技术，广泛的应用于畜牧生产、基因编辑研究、治疗性克隆等领域。在畜牧生产上，克隆技术已经能够应用于扩繁优良种畜、生产生物反应器以及节粮环保和抗病品种的培育。但是SCNT胚胎的低发育效率一直是限制其扩大应用的主要原因。导致SCNT胚胎的发育效率低的诸多原因中，早期胚胎细胞凋亡导致的发育停滞一直是一个重要原因。胚胎细胞的凋亡有利于去除发育异常的细胞，但是超出某种程度的凋亡则会导致胚胎发育停滞。大量的研究表明在附值前的胚胎中观察到过度凋亡的发生，凋亡的细胞发生皱缩，染色质凝集，DNA断裂。导致SCNT胚胎细胞过度凋亡的原因包括合子激活的异常、染色体的异常分离、卵母细胞、体外操作流程、培养环境。已经有研究表明，通过添加细胞因子IGF1、激素褪黑素、维生素C都能抑制克隆胚胎细胞的凋亡从而提高克隆胚胎的发育效率。

白细胞介素17(interleukin 17，IL17)是一类细胞因子家族，目前已有IL-17A-F等6个成员通过基因组测序和蛋白质组学鉴定并克隆。现有的研究表明IL17家族蛋白主要在免疫方面起到作用，主要是通过诱导细胞表达促炎细胞因子、趋化因子、抗菌肽，增强细胞免疫应答，参与炎症和黏膜宿主防御，在病菌感染、肿瘤发生中也具有一定的功能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂及其在提高克隆胚胎发育质量、提高动物克隆效率领域、抑制体外培养胚胎细胞凋亡上的应用。

本发明的一个方面，提供了一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂，该添加剂包括IL17家族中的一种或多种细胞因子。

在某些实施方式中，提高克隆胚胎发育质量的添加剂为IL17D。

在某些实施方式中，提高克隆胚胎发育质量的添加剂IL17D浓度为50-100ng/mL。

在某些实施方式中，提高克隆胚胎发育质量的添加剂IL17D浓度为50ng/mL。

在某些实施方式中，提高克隆胚胎发育质量的添加剂IL17D在克隆胚胎激活后0h时添加。

本发明的另一个发明，提供了一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂在提高克隆胚胎发育质量上的应用。该添加剂为IL17家族中的一种或多种细胞因子；优选地，该添加剂为IL17D；优选地，该添加剂为50-100ng/mL浓度的IL17D；优选地，该添加剂为50ng/mL浓度的IL17D；优选地，该添加剂为50ng/mL浓度的IL17D且在克隆胚胎激活后0h时添加。

本发明的第三个方面，提供了一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂在提高动物克隆效率领域上的应用。该添加剂为IL17家族中的一种或多种细胞因子；优选地，该添加剂为IL17D；优选地，该添加剂为50-100ng/mL浓度的IL17D；优选地，该添加剂为50ng/mL浓度的IL17D；优选地，该添加剂为50ng/mL浓度的IL17D且在克隆胚胎激活后0h时添加。

本发明的第四个方面，提供了一种提高克隆胚胎发育质量的添加剂在抑制体外培养胚胎细胞凋亡上的应用。该添加剂为IL17家族中的一种或多种细胞因子；优选地，该添加剂为IL17D；优选地，该添加剂为50-100ng/mL浓度的IL17D；优选地，该添加剂为50ng/mL浓度的IL17D；优选地，该添加剂为50ng/mL浓度的IL17D且在克隆胚胎激活后0h时添加。