[发明专利]一种重组视黄醇结合蛋白4及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202110623526.5 | 申请日： | 2021-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN113234135B | 公开（公告）日： | 2022-04-29 |
| 发明（设计）人： | 王民燕;邱雪妮;褚旭明;夏杰 | 申请（专利权）人： | 宁波赛珀生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K16/18;C12N15/12;C12N15/70;G01N33/68 |
| 代理公司： | 浙江中桓凯通专利代理有限公司 33376 | 代理人： | 杨靖茹 |
| 地址： | 315000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 视黄醇 结合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组视黄醇结合蛋白4，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO.1或3所示。
2.一种权利要求1所述的重组视黄醇结合蛋白4的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5或7所示。
3.一种重组载体，其特征在于，所述载体含有如权利要求2所述的重组视黄醇结合蛋白4的基因。
4.一种权利要求1所述的重组视黄醇结合蛋白4的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10：对视黄醇结合蛋白4的氨基酸序列进行氨基酸的替换，得到突变氨基酸序列；
S20：用大肠杆菌优势密码子将突变氨基酸序列反向翻译成核苷酸序列，并通过PCR技术，得到重组视黄醇结合蛋白4基因；
S30：将重组视黄醇结合蛋白4基因进行双酶切，并连接到经过双酶切的载体上，得到表达载体；
S40：将表达载体转化大肠杆菌感受态细胞，得到视黄醇结合蛋白4表达菌株，进行培养、诱导表达、纯化，获得所述重组视黄醇结合蛋白4。
5.根据权利要求4所述的重组视黄醇结合蛋白4的制备方法，其特征在于，所述视黄醇结合蛋白4的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示，所述突变氨基酸序列和核苷酸序列为SEQ ID NO.1和5、SEQ ID NO.3和7中的一组或者多组。
6.根据权利要求5所述的重组视黄醇结合蛋白4的制备方法，其特征在于，所述SEQ IDNO.1是将视黄醇结合蛋白4的氨基酸序列中20位的F替换为Y获得，所述SEQ ID NO.3是将视黄醇结合蛋白4的氨基酸序列中20位的F替换为Y同时将35位的L替换为G获得。
7.根据权利要求4所述的重组视黄醇结合蛋白4的制备方法，其特征在于，所述步骤S30中的双酶切是使用NdeI和XhoI进行双酶切，载体为pET-32a(+)载体，表达载体为pET-32a(+)-RBP4。
8.一种权利要求1所述的重组视黄醇结合蛋白4在制备视黄醇结合蛋白4抗原中的应用。
9.一种权利要求1所述的重组视黄醇结合蛋白4在制备视黄醇结合蛋白4抗体中的应用。
10.一种权利要求1所述的重组视黄醇结合蛋白4在视黄醇结合蛋白4检测中作为标准品的应用。
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