[发明专利]一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗

说明书

本发明公开了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在我国自主研发的天花疫苗株痘苗病毒天坛株的基础上，通过转染带有新冠刺突蛋白S编码基因及TK区同源臂的重组质粒，经过重组及筛选过程，获得在TK区导入新冠S蛋白编码序列的重组病毒TK‑S，重组病毒感染细胞后能检测到新冠S蛋白的表达。随后，将此重组病毒免疫小鼠，在小鼠血清中检测到较高的S特异性抗体滴度及中和抗体滴度。本发明建立了一种基于痘苗病毒天坛株的表达S蛋白的新型冠状病毒疫苗，可以解决目前新冠对全球公共卫生健康造成的威胁，是治疗和预防新型冠状病毒感染的得力措施。

技术领域

本发明涉及疫苗制备领域，尤其涉及一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗。

背景技术

痘病毒(Poxvirus)是一类较大的DNA病毒，基因组约200-300kbp，主要包括痘苗病毒(Vaccinia virus)、天花病毒(Variola virus)、牛痘病毒(Cowpox virus)和猴痘病毒(Monkey poxvirus)等。痘苗病毒具有宿主范围广，对外源基因的容量大(25kbp)及在细胞质复制等特点，目前以载体的形式用于多种疫苗的构建及溶瘤病毒的构建中，如人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)疫苗、埃博拉病毒(Ebola virus) 疫苗等。而痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)是中国自主研发并成功用于预防天花的疫苗毒株，在消灭天花的过程中发挥了重要的作用，已作为中国防止天花再次出现的应急储备疫苗株。

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)为有包膜的单股正链RNA病毒，与早期流行爆发威胁公共健康的SARS、MERS同属于冠状病毒科β属。2019 年底至今，SARS-CoV-2感染导致的肺炎(COVID19)疫情已为世界公共卫生健康造成极大威胁，对全世界社会经济的发展也带来前所未有的冲击。

SARS-CoV-2利用病毒表面的刺突(spike，S)蛋白与靶细胞表面的受体血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme-2，ACE-2)结合，通过构象变化和蛋白酶切暴露其融合肽，介导病毒囊膜和靶细胞膜融合，并释放病毒基因组。由于冠状病毒S蛋白暴露于病毒表面并介导病毒与受体的结合，使其成为中和抗体的主要靶点。

以SARS-CoV-2的S蛋白为靶标设计的疫苗和中和抗体也是目前防治冠状病毒感染的主要手段和研发热点。虽然有少数抗病毒药物对新型冠状病毒的感染有一定疗效，但并不能消除新型冠状病毒给人类造成的威胁，因此疫苗接种仍然是新型冠状病毒的得力措施。

本申请建立了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在我国自主研发的天花疫苗株痘苗病毒天坛株的基础上，在TK区导入新冠的S 蛋白编码序列，构建能够表达新冠S蛋白的重组病毒TK-S。将此重组病毒免疫小鼠，在小鼠血清中检测到较高的S特异性抗体滴度及中和抗体滴度。据此，本申请建立了一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗，在痘苗病毒天坛株基因组的胸苷激酶区插入了编码SARS-CoV-2刺突蛋白S的核苷酸序列，所述编码SARS-CoV-2刺突蛋白S的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

上述的基于痘苗病毒天坛株的新型冠状病毒疫苗中，利用表达 SARS-CoV-2刺突蛋白S的重组质粒pTK-S构建重组病毒，重组质粒pTK-S 的序列如SEQ ID NO：2所示。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：