[发明专利]一种检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法在审
| 申请号： | 202110613896.0 | 申请日： | 2021-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN113325176A | 公开（公告）日： | 2021-08-31 |
| 发明（设计）人： | 温贵兰;陈广;龚新勇;程振涛;文明;孙芸 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;C07K16/10;C07K16/06 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 张行超 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 白血病 p27 夹心 直接 elisa 方法 | ||
1.一种检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)用禽白血病病毒RSA株p27基因序列设计一对引物以扩增p27基因，构建重组表达载体经诱导表达获得重组表达蛋白上清表达，上清表达经过纯化后作为免疫原，制备兔源多克隆抗体；
2)将包被兔源多克隆抗体的酶标板进行洗涤，37℃封闭1h，洗板；
3)加入待检血清进行孵育，洗板；
4)加入酶标抗体进行孵育，洗板；
5)加入TMB显色液显色，最后加入显色终止液，终止反应；
6)利用酶标仪测定步骤5)酶标板孔中液体OD450nm值，根据临界值判定阴阳性。
2.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述禽白血病病毒为病毒RSA株。
3.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述一对引物的引物序列如下：
p27-EcoR I-F：CGGAATTCATGCCTGTAGTGATTAAGACAG；
p27-Xba I-R：GCTCTAGACCTAGGGCTGGATAGCAGAC。
4.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述包被兔源多克隆抗体的浓度为4μg/mL，包被条件为37℃2h后4℃过夜，封闭条件为37℃封闭2h。
5.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述待检血清的反应条件为37℃作用0.5h。
6.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述酶标抗体的稀释倍数为1:10000，反应时间为37℃作用1h。
7.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述显示的条件为37℃作用15min。
8.根据权利要求1所述的检测禽白血病P27的双抗夹心直接ELISA方法，其特征在于，所述临界值判定阴阳性的标准为：当OD450nm大于0.222是阳性，小于0.222是阴性。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于贵州大学，未经贵州大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110613896.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
