[发明专利]一种促进干细胞体外增殖和分化的培养方法有效
| 申请号： | 202110609716.1 | 申请日： | 2021-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN113201491B | 公开（公告）日： | 2021-12-07 |
| 发明（设计）人： | 郭伟鑫 | 申请（专利权）人： | 四川美科奇生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 杨立 |
| 地址： | 610041 四川省成都*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 促进 干细胞 体外 增殖 分化 培养 方法 | ||
1.一种适用于培养间充质干细胞的无血清培养基，其特征在于，每1L所述无血清培养基由以下成分组成：
血小板裂解物 1~5%；
银耳多糖混合物 3~10mg/mL；
二氢硫辛酸 0.1~0.2%；
基础培养基补足；
其中，所述银耳多糖混合物由分子量为25万Da的银耳多糖和分子量为78万Da的银耳多糖按重量比为3:1~2组成。
2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，每1L所述无血清培养基由以下成分组成：
血小板裂解物 1~3.5%；
银耳多糖混合物 3~8mg/mL；
二氢硫辛酸 0.1~0.2%；
基础培养基补足。
3.如权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于，每1L所述无血清培养基由以下成分组成：
血小板裂解物 3.2%；
银耳多糖混合物 6mg/mL；
二氢硫辛酸 0.12%；
基础培养基补足。
4.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，所述分子量为25万Da的银耳多糖和所述分子量为78万Da的银耳多糖之间的重量比为3:1。
5.如权利要求1~3任一所述的无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基选自DMEM-F12培养基和L-DMEM培养基中的一种。
6.如权利要求1~5任一所述的无血清培养基在体外培养间充质干细胞中的用途。
7.一种促进间充质干细胞体外增殖和分化的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将处理后的脐带于无菌的条件下剪碎，形成组织块；
S2、将上述组织块接种于如权利要求1~5任一所述的无血清培养基中，于37℃、5%CO2的条件下进行原代分离培养；24h补液，以后每隔4d换液；
S3、待细胞汇合度至80~90%时采用胰酶消化传代，将消化获得的间充质干细胞以1~3×104 /cm2的密度接种于如权利要求1~5任一所述的无血清培养基中，于37℃、5%CO2、饱和湿度的条件下行体外连续传代培养。
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